AIV-PB2特異性M1GS核酶的構(gòu)建及其活性研究.pdf

1、本論文針對禽流感病毒（AIV）的關鍵基因--復制酶基因PB2，設計并構(gòu)建了八種M1GS核酶，分別是M1GS-T436、M1GS-T934、M1GS-T1105、M1GS-T1523、M1GS-T1771、M1GS-C341、M1GS-C1531、M1GS-C1760。
　　通過體外切割實驗，檢測其對底物RNA的切割活性，結(jié)果顯示：M1GS-T436、M1GS-T1105、M1GS-T1523、M1GS-C1531和M1GS-C17

2、60這五種核酶均具有明顯的特異切割活性，核酶M1GS-C341也具有較強的切割活性，但屬于非特異性切割，而核酶M1GS-T934和M1GS-T1771則無明顯的切割活性。進一步通過體外切割產(chǎn)物電泳圖及各核酶相對活性表等一系列進行分析，選擇活性較高的三種核酶M1GS-T1105、M1GS-T1523、M1GS-C1760作為對象，分別構(gòu)建上述三種核酶的真核表達重組質(zhì)粒（M1GS/T1105-PLXSN、M1GS/T1523-PLXSN、M

3、1GS/C1760-PLXSN）以及PB2蛋白與綠色熒光蛋白融合表達的質(zhì)粒（PB2-EGFP），分別將這些M1GS真核表達重組質(zhì)粒與PB2-EGFP共轉(zhuǎn)染MDCK細胞。Western Blot結(jié)果顯示，三種M1GS核酶均能顯著抑制蛋白PB2的表達；掃描細胞的熒光強度后發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染核酶M1GS-T1105、M1GS-T1523和M1GS-C1760可大大降低綠色熒光的強度，抑制率分別為77.53±1.98％、58.84±0.86%和80.37