高糖狀態(tài)對牙齦卟啉單胞菌脂多糖引發(fā)宿主炎癥反應(yīng)的影響研究.pdf

1、目的：
　　采用高糖、牙齦卟啉單胞菌（ Porphyromonas gingivalis， P.g）脂多糖（ Lipopolysaccharide,LPS）刺激體外培養(yǎng)的牙周膜細(xì)胞（ Human periodontal ligament cells，hPDLCs），采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測hPDLCs在不同時間點分泌白介素-6（Interleukin

2、-6,IL-6）和腫瘤壞死因子-α（Tumor necrotic-α, TNF-α）的變化狀況及意義，探討高糖狀態(tài)及牙齦卟啉單胞菌內(nèi)毒素LPS刺激hPDLCs上調(diào)炎癥細(xì)胞因子的作用及機制，尋求糖尿病和牙周炎免疫病理機制的基礎(chǔ)研究依據(jù)，為牙周炎伴糖尿病的炎癥控制和組織修復(fù)提供新的思路和方法。
　　方法：
　　1、選擇無全身系統(tǒng)疾病、吸煙史的12-18歲正畸治療患者，因正畸治療需要而拔除的無齲、無牙周炎癥的健康前磨牙，在牙脫離牙

3、槽窩后，立即刮下根中1/3的牙周膜組織，用組織塊法進(jìn)行hPDLCs的原代培養(yǎng)，進(jìn)行首次傳代，取第4-6代細(xì)胞用于實驗。
　　2、采用ELISA檢測hPDLCs在高糖狀態(tài)、高糖狀態(tài)及P.g LPS(10μg/ml)刺激6、12h后TNF-α、IL-6的分泌情況，并與空白對照組低糖、P.g LPS組（低糖）進(jìn)行對照。
　　結(jié)果：
　　1、在人牙周膜組織塊原代培養(yǎng)一周后，鏡下可見組織塊周圍有少量細(xì)胞爬出，細(xì)胞呈長梭形或星形，

4、有2-4個細(xì)胞質(zhì)突，圍繞組織塊呈放射狀排布，部分交織成網(wǎng)狀。從組織塊爬出至長滿整個培養(yǎng)瓶需要2周，長滿后即用于傳代，取4-6代hPDLCs用于實驗。
　　2、在經(jīng)高糖狀態(tài)、P.g LPS以及二者聯(lián)合刺激6h后，hPDLCs分泌TNF-α明顯高于空白對照組（P＜0.05）,實驗結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義，且隨著時間的增加，效果更加明顯，且呈時間依賴性。尤其是在高糖及LPS聯(lián)合刺激12h后，hPDLCs分泌TNF-α的水平均明顯高于其余各組。<

5、br>　　3、在經(jīng)高糖狀態(tài)刺激6h后，hPDLCs分泌IL-6相對與空白對照組無明顯變化，無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），但由P.g LPS及P.g LPS+高糖狀態(tài)聯(lián)合刺激的兩組相對于空白對照組（P＜0.05），IL-6的分泌都顯著升高，且隨著時間的延長而逐漸增加，實驗結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1、高糖狀態(tài)可促進(jìn)hPDLCs分泌TNF-α、IL-6。
　　2、P.g LPS可促進(jìn)hPDLCs分泌TNF-α、I