牙齦干細(xì)胞治療小鼠放射性口炎機(jī)理的初步探討.pdf

1、目的:
　　放射性口腔黏膜炎在頭頸部腫瘤患者放療術(shù)后的發(fā)生率極高，對(duì)患者的近遠(yuǎn)期療效與生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重影響;牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞作為一種新的前體細(xì)胞，具備有同骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞等其余干細(xì)胞類似的特性，更有其不可比擬的優(yōu)勢。本實(shí)驗(yàn)將牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用于小鼠放射性口腔黏膜炎的治療中，旨在探討牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞在該治療過程中的機(jī)理，為放射性口腔黏膜炎的防治提供新的科研思路與臨床依據(jù)。
　　方法:
　　1、酶解法

2、分離培養(yǎng)GFP+-C57/BL轉(zhuǎn)基因小鼠牙齦間充質(zhì)干細(xì)胞(gingiva-derivedmesenchymal stem cells,GMSCs)。
　　2、選取60只6-8周C57/BL小鼠隨機(jī)分為以下3組:
　　(1) GMSC對(duì)照組:不放射，通過小鼠尾靜脈注射106個(gè)GMSCs。
　　(2)放射治療組:通過simens Primus電子直線加速器給予小鼠25Gy放射劑量/只，放射后3天通過小鼠尾靜脈注射106個(gè)G

3、MSCs。
　　(3)放射對(duì)照組:通過siemens Primus電子直線加速器給予小鼠25Gy放射劑量/只，放射后3天通過小鼠尾靜脈注射無細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM。
　　3、建立C57/BL小鼠放射性口炎模型:采用siemens Primus電子直線加速器，以每只小鼠單次25Gy劑量進(jìn)行放射，根據(jù)臨床癥狀與組織學(xué)表現(xiàn)確定模型建立。
　　4、觀察GMSCs在小鼠唇、舌組織中歸巢，檢測唇、舌組織中相關(guān)因子變化
　　(1)

4、 GMSC對(duì)照組:小鼠注射GMSCs后3天、7天、10天取唇、舌組織固定、包埋后通過免疫組化檢測細(xì)胞歸巢。
　　(2)放射治療組:小鼠注射GMSCs后3天、7天、10天取唇、舌組織固定、包埋后通過免疫組化檢測細(xì)胞歸巢;同時(shí)ELISA法檢測局部組織中IL-6、IL-10、SDF-1的表達(dá)。
　　(3)放射對(duì)照組:小鼠注射DMEM后3天、7天、10天取唇、舌組織，ELISA法檢測局部組織中IL-6、IL-10、SDF-1的表達(dá)。

5、
　　結(jié)果:
　　1、分離培養(yǎng)出C57/BL小鼠GMSCs。
　　2、小鼠放射性口炎模型唇、舌組織中GMSCs細(xì)胞歸巢的免疫組化結(jié)果:GMSC對(duì)照組小鼠組織未觀察到明顯的GFP+細(xì)胞歸巢;放射對(duì)照組小鼠組織上皮層可觀察到GFP+細(xì)胞歸巢，以注射后3天數(shù)量最多，注射后7天、10天數(shù)量遞減。
　　3、小鼠局部組織中IL-6、IL-10、SDF-1水平變化:
　　注射后3天、7天、10天，放射治療組唇、舌IL-6