ST3GAL6通過(guò)調(diào)節(jié)Akt-mTOR信號(hào)通路介導(dǎo)miR-26a對(duì)肝細(xì)胞癌增殖、遷移和侵襲能力的調(diào)節(jié).pdf

1、目的：通過(guò)分析比較 ST3GAL6在具有不同侵襲能力的肝癌細(xì)胞株MHCC97-H(高侵襲性)和MHCC97-L(低侵襲性)中的表達(dá)差異，闡明ST3GAL6與肝細(xì)胞癌生物學(xué)特征的相關(guān)性以及在肝細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床意義，并深入探討ST3GAL6發(fā)揮作用的主要分子生物學(xué)機(jī)制，從而為進(jìn)一步提高肝細(xì)胞癌的早期診斷、治療效果及預(yù)后提供新的研究策略及方向。
　　方法：
　　(1)應(yīng)用qRT-PCR技術(shù)在人肝癌高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株（MHCC97-H

2、、MHCC97-L）和正常肝細(xì)胞（LO2）以及肝癌和癌旁組織中測(cè)定ST3GAL6與miR-26a的表達(dá)差異，初步探討ST3GAL6與miR-26a在肝癌中的表達(dá)及臨床意義。
　　(2)細(xì)胞增殖能力通過(guò)CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)與克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定，細(xì)胞的遷移與侵襲能力分別通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)測(cè)定。通過(guò)建立動(dòng)物模型來(lái)測(cè)定miR-26a與ST3GAL6/Akt/mTOR通路對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)速度的作用。
　　(3)應(yīng)用靶基因預(yù)測(cè)網(wǎng)站

3、對(duì)ST3GAL6的上游靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果選取差異的miRNAs，通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)對(duì)預(yù)測(cè)的上游靶基因進(jìn)行確認(rèn)。
　　(4)分別上調(diào)和下調(diào)miR-26a與ST3GAL6的表達(dá)水平，利用體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)測(cè)定改變前后的肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的變化，進(jìn)一步探討miR-26a與ST3GAL6在肝癌發(fā)生發(fā)展中所起的臨床意義。
　　(5)應(yīng)用功能獲得與功能缺失實(shí)驗(yàn)分析miR-26a與ST3GAL6對(duì)Akt/mTOR信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用，

4、Akt/mTOR信號(hào)通路活性的改變通過(guò)蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　(1) ST3GAL6在肝癌組織與細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)。
　　(2) ST3GAL6調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的增殖、遷移與侵襲能力。
　　(3) miR-26a為ST3GAL6的負(fù)向調(diào)節(jié)因子。
　　(4) miR-26a通過(guò)靶向調(diào)節(jié)ST3GAL6來(lái)調(diào)控肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力
　　(5) ST3GAL6介導(dǎo)miR-26a對(duì)Akt/m

5、TOR信號(hào)通路的調(diào)節(jié)作用。
　　(6) miR-26a通過(guò)ST3GAL6/Akt/mTOR通路調(diào)節(jié)小鼠體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)速度。
　　結(jié)論：
　　(1) ST3GAL6在MHCC97-H與MHCC97-L細(xì)胞之間以及肝癌組織與正常肝組織之間表達(dá)水平存在差別，改變ST3GAL6的表達(dá)量能夠顯著改變肝細(xì)胞癌的增殖與轉(zhuǎn)移能力。
　　(2) ST3GAL6通過(guò)調(diào)控下游Akt/mTOR信號(hào)通路介導(dǎo)miR-26a對(duì)肝細(xì)胞癌的增殖、