Pluronic F127水凝膠負載脂肪干細胞對糖尿病性潰瘍血管生成及愈合作用的研究.pdf

1、目的:糖尿病難愈性潰瘍是糖尿病患者最嚴重、治療費用最高的慢性并發(fā)癥之一。相較于正常創(chuàng)面，糖尿病性潰瘍往往遷延不愈，其最具特征性的變化是血管發(fā)生受損和肉芽組織形成障礙。目前臨床及動物實驗均顯示干細胞療法可以促進創(chuàng)面愈合，然而，干細胞移植到糖尿病難愈性創(chuàng)面面臨著易被原位清除、移植效率低等難題。如何將干細胞遞送到糖尿病傷口部位同時保持干細胞的高存活率是干細胞移植治療糖尿病性潰瘍的一個關鍵挑戰(zhàn)。研究表明，采用新型智能水凝膠作為三維支架理化模擬細

2、胞外基質，為干細胞移植到宿主創(chuàng)面提供合適的載體是這一問題一種有效的解決途徑。Pluronic F127為聚氧乙烯聚丙乙烯三嵌段聚合物，其水凝膠溶液具有獨特的溫敏特性，在一定濃度和溫度下可由液態(tài)轉變?yōu)槎嗫兹S結構的凝膠態(tài)。因其具有醫(yī)用可注射性及良好的生物相容性，已被美國FDA批準用于人體。本實驗以糖尿病大鼠為實驗對象，選取Pluronic F127水凝膠負載脂肪源性干細胞創(chuàng)新性應于糖尿病創(chuàng)面復雜的修復環(huán)境，觀察其對大鼠皮膚創(chuàng)面新生血管形成

3、和愈合作用的影響。
　　方法:第1部分:膠原酶消化法分離培養(yǎng)健康SD大鼠ADSCs并流式鑒定細胞表型。建立SD大鼠1型糖尿病模型，MTT法比較糖尿病大鼠和正常大鼠ADSCs的增殖能力以選擇合適的干細胞用于后續(xù)實驗。第2部分，制備Pluronic F127水凝膠并測定凝膠化時間，CCK-8法檢測不同濃度Pluronic F127對ADSCs增殖的影響，選擇細胞親和性最佳的凝膠濃度包裹ADSCs制備Pluronic F127-ADSC

4、s復合物。在成模的24只糖尿病大鼠背部對稱制作2個直徑9mm的全層皮膚切口并隨機分為ADSCs/Gel組、ADSCs組、Gel組、PBS對照組4組(n=6)。分別注射100ul相應溶液于創(chuàng)面。術后觀察創(chuàng)面大體情況并評估各組創(chuàng)面愈合率，HE染色觀察肉芽組織形成情況，CD31免疫組化染色觀察新生血管情況，Ki67檢測組織細胞增殖，qPCR檢測VEGF、TGFβ-1的表達。
　　結果:成功分離純化并流式鑒定ADSCs，MTT結果顯示正常

5、ADSCs較糖尿病來源ADSCs增殖能力更好。CCK-8結果顯示20％的Pluronic F127相較于其他組更適宜細胞生長。動物傷口大體觀和HE染色顯示ADSCs/Gel組愈合較快且組織學評分較佳，在術后14天時愈合率為（97.8±1.8）％，明顯高于其他組(P=0.000)。免疫組化結果示術后7天ADSCs/Gel、ADSCs組的血管數(shù)直觀較Gel、對照組豐富，對術后14天進行微血管計數(shù)ADSCs/Gel組微脈管數(shù)目為(21.0±2

6、.4)個，明顯高于ADSCs組的（15.7±1.4）個(P=0.000)。qPCR結果也顯示實驗組VEGF、TGFβ-1水平在術后7、14天時出現(xiàn)了相應上調(P＜0.05)。免疫熒光結果示ADSCs/Gel組在術后7天時Ki67陽性表達率多于其他三組。
　　結論:局部移植同種異體ADSCs通過Pluronic F127水凝膠的包裹能提高細胞移植到糖尿病性潰瘍創(chuàng)面的效率，從而優(yōu)化了ADSCs促進糖尿病性潰瘍血管生成和創(chuàng)面愈合的作用。