MicroRNA-552以DACH1為目標靶點通過Wnt-β-catenin信號通路促進結(jié)直腸腫瘤細胞的增殖和遷移.pdf

1、目的：
　　旨在探索microRNA-552（miR-552）對結(jié)直腸腫瘤細胞增殖和遷移的影響，探索miR-552下游靶基因以及二者之間的靶向調(diào)控關(guān)系，從而闡明miR-552對結(jié)直腸腫瘤生物學(xué)功能影響的具體分子調(diào)控機制。
　　方法：
　　1.RT-qPCR方法檢測miR-552在結(jié)直腸腫瘤組織及細胞系中的表達。
　　2.構(gòu)建并驗證miR-552抑制性載體miR-552-inhibitor（miR-552-in）轉(zhuǎn)

2、染效率。
　　3.MTT和平板克隆形成實驗檢測miR-552對腫瘤細胞增殖能力的影響。
　　4.Transwell和劃痕實驗檢測miR-552對腫瘤細胞遷移能力的影響。
　　5.靶基因預(yù)測及篩選，熒光素酶報告實驗驗證miR-552的下游靶基因。
　　6.RT-qPCR和Western blotting檢測miR-552靶基因DACH1的mRNA和蛋白表達。
　　7.Western blotting檢測Wnt

3、/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　1.MiR-552在結(jié)直腸腫瘤組織及細胞系中的表達情況:我們檢測了20對結(jié)直腸癌組織和鄰近的正常組織，結(jié)果表明：miR-552在癌組織中的表達明顯高于正常組織。同時，與正常結(jié)直腸細胞NCM460相比，miR-552在結(jié)直腸癌細胞系LOVO、SW620、HCT116中的表達明顯升高，結(jié)果與組織中的表達情況一致。
　　2.與陰性對照組（轉(zhuǎn)染miR-552-NC）

4、相比，轉(zhuǎn)染miR-552-in后，細胞生長速率減慢，平板克隆形成數(shù)目減少，細胞遷移能力降低。
　　3.熒光素酶報告實驗結(jié)果表明：DACH1是miR-552的下游靶基因。
　　4.RT-qPCR和Western blotting結(jié)果表明:miR-552表達下調(diào)時，DACH1 mRNA和蛋白的表達水平均升高。
　　5.Western blotting檢測Wnt/β-catenin信號通路核心蛋白的變化情況。結(jié)果表明：與陰性

5、對照組相比，轉(zhuǎn)染miR-552-in后，Wnt/β-catenin信號通路中核心蛋白，如c-Myc、cyclinD1、β-catenin、GSK3β蛋白表達減少。
　　結(jié)論：
　　通過本實驗研究證明miR-552在結(jié)直腸腫瘤組織和細胞系中均高表達，其作為癌基因可促進腫瘤細胞的增殖和遷移，抑制miR-552表達可降低腫瘤細胞增殖和遷移能力。DACH1是miR-552的下游靶基因，miR-552經(jīng)由Wnt/β-catenin信號