小干擾RNA納米遞送載體及其腫瘤治療應(yīng)用研究.pdf

1、siRNA作為近年來興起的一種核酸類藥物，雖然給腫瘤治療帶來了新的機(jī)遇，但是臨床siRNA藥物的開發(fā)還面臨著巨大的挑戰(zhàn)。通過對(duì)腫瘤進(jìn)行分類診斷，目前已經(jīng)找到了大量的分子靶點(diǎn)，如何從眾多的腫瘤相關(guān)基因中篩選出合適的靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)，以及如何設(shè)計(jì)出良好的siRNA遞送載體用于克服多重給藥障礙成為了目前研究的熱點(diǎn)。本課題根據(jù)腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞基因功能的差異，通過合成新型的聚合物對(duì)現(xiàn)有納米載體進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)高效遞送siRNA到腫瘤細(xì)胞進(jìn)行腫瘤治療，

2、研究內(nèi)容主要分為以下兩個(gè)部分:
　　1.我們根據(jù)對(duì)腫瘤低糖環(huán)境下神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞代謝功能基因的分析，找到了神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞特異性高表達(dá)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體3(GLUT3)。隨后我們篩選了高效靶向GLUT3的siRNA，并用聚乙二醇-聚乳酸嵌段聚合物(PEG-b-PLA)，輔以陽離子脂質(zhì)(BHEM-Chol)，通過雙乳化法制備了包載GLUT3siRNA的納米顆粒。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，我們驗(yàn)證了該納米顆粒將siRNA遞送到神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)瘤干

3、細(xì)胞的能力，并檢測了GLUT3基因沉默對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞葡萄糖攝取、乳酸產(chǎn)生等代謝指標(biāo)的抑制效果，最后通過腫瘤治療實(shí)驗(yàn)證明該siRNA遞送載體可以通過代謝抑制下調(diào)神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的比例，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤生長的抑制。
　　2.針對(duì)陽離子脂質(zhì)輔助的PEG-b-PLA納米顆粒在腫瘤細(xì)胞攝取和胞內(nèi)siRNA釋放上的不足，我們合成了腫瘤酸敏感化學(xué)鍵（Dlinkm）橋聯(lián)的PEG-Dlinkm-PLGA，這種聚合物只在PEG和PLGA中間改變了橋聯(lián)化學(xué)

4、鍵，對(duì)整個(gè)聚合物的改變很小，因此同F(xiàn)DA批準(zhǔn)的PEG-PLGA一樣，具有很好的生物相容性和安全性。通過PEG-Dlinkm-PLGA制備的新型納米顆粒，可以在保留原納米顆粒血液長循環(huán)和腫瘤富集能力的前提下，通過Dlinkm化學(xué)鍵實(shí)現(xiàn)腫瘤部位酸響應(yīng)PEG脫殼，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)納米顆粒的攝取，并通過PLGA替代PLA，加快胞內(nèi)siRNA釋放，從而在整體上提高載藥納米顆粒對(duì)靶基因的沉默效果和腫瘤治療效果。我們分別在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平驗(yàn)證了該納米