姜黃素干預類風濕關節(jié)炎患者破骨細胞生成中NF-κB信號通路的機制研究.pdf

1、目的:觀察姜黃素(Curcumin，Cur)對類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者破骨細胞生成的影響，探索核因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)信號通路在此過程中的調(diào)節(jié)機制，為姜黃素應用于RA骨破壞的防治提供理論依據(jù)。
　　方法:(1)分離RA患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)誘導培養(yǎng)為破骨細胞，在

2、培養(yǎng)過程中給予不同濃度姜黃素進行干預;(2)分組:Control組、Cur2.5μM組、Cur5μM組、Cur10μM組，姜黃素的濃度分別為0、2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L;(3)誘導培養(yǎng)14天后進行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP)染色標記成熟破骨細胞，并行細胞計數(shù);(4) Western Blot檢測各組細胞中IκBα、p-IκBα蛋白的表達

3、;(5) Western Blot檢測細胞漿和細胞核中NF-κB p65的表達;(6)細胞免疫熒光染色法觀察NF-κB p65核易位。
　　結(jié)果:(1)培養(yǎng)14天后，各組細胞均符合破骨細胞的形態(tài)學特征;(2) TRAP染色結(jié)果顯示，與Control組相比，Cur2.5μM組、Cur5μM組和Cur10μM組TRAP陽性細胞數(shù)均明顯減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);(3) Western Blot結(jié)果顯示，與Control組

4、相比，Cur2.5μM組、Cur5μM組和Cur10μM組IκBα的蛋白表達水平明顯升高，p-IκBα的表達水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);(4)與Control組相比，Cur2.5μM組、Cur5μM組和Cur10μM組細胞漿中NF-κB p65的表達水平明顯升高，而細胞核中NF-κB p65的表達水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);(5)細胞免疫熒光染色結(jié)果顯示，在未刺激狀態(tài)下NF-κB p65主要分