白藜蘆醇通過(guò)SIRT1翻譯后修飾PI3K-AKT-DLC1抑制肝癌細(xì)胞增殖和遷移的研究.pdf

1、肝細(xì)胞肝癌是常見的惡性腫瘤之一,在我國(guó)具有較高的死亡率。雖然化療作為肝癌治療重要的一部分,但目前臨床上廣泛使用的化療藥物療效有限，且毒性作用較大，經(jīng)幾次應(yīng)用后還會(huì)發(fā)生耐藥現(xiàn)象。近年來(lái)，采用天然植物的提取物探討對(duì)惡性腫瘤的治療引起了人們的關(guān)注。白藜蘆醇化學(xué)名為芪三酚，是一種存在于多種植物中非黃酮多酚類化合物，除具有防治心血管疾病、調(diào)節(jié)免疫、抗炎癥、抗衰老等作用外，其抗腫瘤活性越來(lái)越得到關(guān)注。本文探究了白藜蘆醇對(duì)于三種肝癌細(xì)胞系HepG2、

2、Be l-7402和SM MC-7721的影響及潛在的作用機(jī)制。用EdU摻入法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)100?M白藜蘆醇處理肝癌細(xì)胞24h后顯著抑制了肝癌細(xì)胞的增殖作用，而在相同條件下白藜蘆醇對(duì)正常肝細(xì)胞系HL-7702的增殖作用抑制不明顯。細(xì)胞凋亡是一種由基因控制機(jī)體自發(fā)的死亡過(guò)程，在腫瘤細(xì)胞中不僅細(xì)胞增殖失去控制，其凋亡能力也出現(xiàn)失衡，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是許多抗腫瘤藥物的發(fā)揮作用的機(jī)制之一。
　　本研究用TUNEL法檢測(cè)白

3、藜蘆醇對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果顯示經(jīng)白藜蘆醇處理后HepG2、Be l-7402和SMMC-7721細(xì)胞凋亡率分別由4±0.83％增加到13±1.32%，3±0.78%增加到14±0.72%，5±0.33%增加到16±1.12%，遠(yuǎn)高于對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率。進(jìn)一步檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的變化結(jié)果顯示白藜蘆醇上調(diào)了肝癌細(xì)胞系中Ba x和c lea ved-PARP蛋白的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)了Bcl-2、casp ase-3、caspase-7和PAR

4、P蛋白的表達(dá)。腫瘤細(xì)胞中由于抑癌基因和原癌基因發(fā)生了突變，導(dǎo)致信號(hào)通路發(fā)生異常，其中PI3K/AKT信號(hào)通路在多種癌細(xì)胞中異常持續(xù)激活，不斷發(fā)揮抗凋亡的作用。本實(shí)驗(yàn)中白藜蘆醇抑制了HepG2細(xì)胞PI3K/AKT信號(hào)通路中的p-PI3K、p-AKT以及下游的p-FoxO3a的表達(dá)水平。SIRT1作為腫瘤發(fā)展過(guò)程中一個(gè)關(guān)鍵性的調(diào)節(jié)因子，在Hep G2細(xì)胞中白藜蘆醇上調(diào)了SIRT1的蛋白表達(dá)和酶活力，并減少SIRT1下游靶分子FoxO1的乙酰

5、化水平。為了探究SIRT1在PI3K/AKT信號(hào)通路中的作用，我們使用SIRT1特異性的抑制劑EX527抑制其酶活后，發(fā)現(xiàn)p-PI3K、p-AKT的蛋白表達(dá)水平又增加了，這就說(shuō)明白藜蘆醇通過(guò)激活SIRT1的活性來(lái)抑制PI3K/AK T信號(hào)通路。腫瘤抑制基因DLC1不僅在肝癌中表達(dá)缺失，而且在人類多種惡性腫瘤中也表達(dá)低下甚至缺失，它可通過(guò)其RhoGAP結(jié)構(gòu)域調(diào)控細(xì)胞增殖、細(xì)胞骨架組裝、黏著斑組裝等多種細(xì)胞進(jìn)程，同時(shí)DLC1的翻譯后修飾作用

6、也會(huì)影響其發(fā)揮抑癌作用。我們發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇顯著增加了肝癌細(xì)胞系中DLC1的表達(dá)水平并且抑制了HepG2細(xì)胞的遷移作用，用免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)探究AK T對(duì)DLC1的作用發(fā)現(xiàn)DLC1在一定程度上作為 AK T下游分子被磷酸化，而磷酸化后 DLC1功能發(fā)生了哪些改變還需要進(jìn)一步的研究。結(jié)果顯示：白藜蘆醇通過(guò)上調(diào)SIRT1的蛋白水平和其酶活性，調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號(hào)通路，減少p-PI3K、p-AKT、p-FoxO3a和Ac-FoxO1的表達(dá)水平，增