白藜蘆醇通過(guò)激動(dòng)Sirt1減輕大鼠神經(jīng)病理性疼痛的研究.pdf

1、目的：觀察Ⅲ類(lèi)組蛋白去乙?；?histone deacetylaseⅢ，HDACⅢ)Sirt1(Silent information regulator1)在坐骨神經(jīng)慢性壓迫性損傷(chronic constrictioninjury，CCI)模型大鼠脊髓表達(dá)的變化;研究Sirt1的激動(dòng)劑白藜蘆醇(resveratrol，Res)鞘內(nèi)注射對(duì)CCI大鼠的鎮(zhèn)痛作用，初步探討Sirt1介導(dǎo)的去乙?；瘷C(jī)制在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生發(fā)展中的作用。

2、r>　　方法：1.雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)和CCI組(n=8)。CCI組，按照Bennett和Xie的方法建立大鼠CCI模型;sham組，只暴露左側(cè)坐骨神經(jīng)但不結(jié)扎。術(shù)后第1、3、5、7、9、11、14天，測(cè)定患肢機(jī)械縮足反射閾值(Mechanicalwithdrawal threshold，MWT)和熱縮足反射潛伏期(Thermal withdrawal latency，TWL);術(shù)后第1、3、5、7、9、11、14天

3、測(cè)完行為學(xué)后處死大鼠，Western-blot檢測(cè)脊髓Sirt1、Ac-H3和H3的表達(dá)變化。
　　2.腰段鞘內(nèi)置管成功的大鼠隨機(jī)分為7組(n=8):sham組、sham+DMSO組、sham+Res300μg組、CCI組、CCI+DMSO組、CCI+Res30μg組、CCI+Res300μg組。(1) Res預(yù)處理對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的影響:于CCI術(shù)前1天至術(shù)后2天鞘內(nèi)注射Res（30μg或300μg，溶于100％的DMSO）或1

4、00％的DMSO各10μl;(2) Res后處理對(duì)神經(jīng)病理性疼痛的影響:于CCI術(shù)后第4～7天鞘內(nèi)注射Res(30μg或300μg)或100％的DMSO各10μl。Western-blot檢測(cè)脊髓Sirt1、Ac-H3、H3的表達(dá)變化。術(shù)后第7天免疫熒光觀察脊髓背角Sirt1、Ac-H3表達(dá)的變化。
　　3.CCI大鼠術(shù)后4～7天鞘內(nèi)注射Res300μg或DMSO(n=6)，分為空白對(duì)照(naive)組、sham組、CCI組、CC

5、I+DMSO組、CCI+Res300μg組，第7天測(cè)完疼痛行為學(xué)后，處死大鼠行脊髓腰膨大處取材，HE染色觀察Res的神經(jīng)毒性作用。
　　結(jié)果：1.與sham組相比，CCI術(shù)后第3天，大鼠術(shù)側(cè)后肢MWT和TWL減低(P＜0.01)，并于術(shù)后第7天降至最低，一直持續(xù)至術(shù)后第14天;脊髓Sirt1蛋白表達(dá)于術(shù)后第3天呈現(xiàn)下調(diào)，于第7天減少最明顯并持續(xù)至術(shù)后第14天(P＜0.01); Ac-H3蛋白表達(dá)于術(shù)后第3天明顯增加(P＜0.05)

6、，至第7天達(dá)到高峰(P＜0.01)，持續(xù)至術(shù)后第14天仍明顯高于sham組(P＜0.05)。
　　2.免疫熒光結(jié)果顯示，Sirt1在大鼠脊髓和DRG神經(jīng)元中都有分布。在脊髓組織，Sirt1主要表達(dá)于脊髓背角的Ⅰ層（邊緣層）和Ⅱ?qū)樱z質(zhì)區(qū)），在其他板層也有少量分布。Ac-H3分布在脊髓全層，在灰質(zhì)全層均有表達(dá)并明顯多于白質(zhì)，在脊髓背角Ⅰ～Ⅱ?qū)颖磉_(dá)致密。
　　3.與CCI+DMSO組相比，CCI+Res30μg組和CCI+Res

7、300μg組大鼠患肢MWT和TWL明顯升高(P＜0.01)。與CCI+DMSO組相比，CCI+Res300μg組大鼠脊髓Sirt1蛋白表達(dá)增加，Ac-H3蛋白表達(dá)減少(P＜0.01)。
　　4.HE染色觀察Res脊髓毒性作用:結(jié)果顯示，與sham組比較，DMSO組和Res組脊髓組織沒(méi)有明顯的變性、壞死改變，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　結(jié)論：1.Sirt1在大鼠脊髓和DRG神經(jīng)元中都有分布。Sirt1主要表達(dá)于脊髓