MyD88在中國(guó)鹵蟲不同發(fā)育時(shí)期及在革蘭氏菌刺激下的表達(dá)模式.pdf

1、中國(guó)鹵蟲(Artemia sinica)屬于節(jié)肢動(dòng)物門(Phylum Arthropoda),甲殼綱(ClassCrustacea),鰓足亞綱(Subclass Branchiopoda),無(wú)甲目(Order Anostaca),鹵蟲科(FamilyArtemiidae),鹵蟲屬(Genus Artemia)。鹵蟲廣泛分布在沿海及內(nèi)陸高鹽水體中,是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中的重要餌料生物。由于鹵蟲發(fā)育過(guò)程短并可抵抗干燥、高溫、高鹽等不良環(huán)境,使其成為

2、一種重要的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物而被廣泛研究,特別是作為先天免疫研究的實(shí)驗(yàn)材料發(fā)揮了重要的作用。無(wú)脊椎動(dòng)物沒有特異性免疫,先天免疫是其唯一的防御機(jī)制。在其先天免疫反應(yīng)中,Toll途徑在抗真菌及抗革蘭氏陽(yáng)性菌應(yīng)答誘導(dǎo)抗菌肽表達(dá)過(guò)程中是必需的,而MyD88是Toll信號(hào)途徑中的一個(gè)關(guān)鍵的轉(zhuǎn)接蛋白。當(dāng)機(jī)體受到感染后Spatzle活化Toll,Toll將信號(hào)傳給MyD88,再以MyD88為中心引發(fā)一系列信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)做出免疫應(yīng)答反應(yīng)。此外,在果蠅胚胎發(fā)育過(guò)程中

3、發(fā)現(xiàn)MyD88對(duì)果蠅背腹軸的形成有一定的作用。所以對(duì)鹵蟲胚胎發(fā)育和免疫機(jī)制過(guò)程中MyD88基因表達(dá)模式的研究有著十分重要的意義。本論文以中國(guó)鹵蟲為實(shí)驗(yàn)材料,采用分子生物學(xué)技術(shù)克隆了中國(guó)鹵蟲MyD88基因部分片段,經(jīng)Blast比對(duì)確定該序列為中國(guó)鹵蟲MyD88基因。采用RACE技術(shù)獲得了1555bp的中國(guó)鹵蟲MyD88基因的cDNA全序列。對(duì)其進(jìn)行分子生物學(xué)分析發(fā)現(xiàn)該序列包括一個(gè)長(zhǎng)度為1182bp的開放閱讀框,編碼393個(gè)氨基酸,蛋白結(jié)構(gòu)

4、及氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)其包含MyD88特有的N端死亡結(jié)構(gòu)域,C端含有TIR結(jié)構(gòu)域的box1、box2基序。經(jīng)整體免疫組化技術(shù)發(fā)現(xiàn)中國(guó)鹵蟲MyD88基因表達(dá)部位主要集中于頭、胸部,推測(cè)可能與鹵蟲免疫因子形成有關(guān)。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)對(duì)MyD88在鹵蟲胚胎發(fā)育不同時(shí)期表達(dá)量進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)MyD88在中國(guó)鹵蟲胚胎發(fā)育各時(shí)期呈組成性表達(dá),并且呈現(xiàn)先高后低的趨勢(shì),在0h和5h表達(dá)量最高,其他各時(shí)期差別不大。推測(cè)MyD88可能在鹵蟲胚胎發(fā)育中作為一種母