貴陽常見嗜尸性蠅類生活史和蛹期轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　觀察貴陽地區(qū)夏季瘦葉帶綠蠅（Hemipyrellia ligurriens）、廄腐蠅（Muscina stabulans）、臺(tái)灣別麻蠅（Boettcherisca formosensis）在室內(nèi)自然條件下生活史與積溫的關(guān)系；探討棕尾別麻蠅（Boettcherisca peregrine）蛹3個(gè)不同發(fā)育時(shí)間轉(zhuǎn)錄組的差異表達(dá)，為進(jìn)一步探究棕尾別麻蠅蛹各個(gè)時(shí)間轉(zhuǎn)錄組中的差異基因提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　方法：
　　1.

2、于貴州醫(yī)科大學(xué)和貴州警官職業(yè)學(xué)院兩地，分別放置家兔尸體誘捕臺(tái)灣別麻蠅、廄腐蠅、瘦葉帶綠蠅3種嗜尸性蠅類進(jìn)行飼養(yǎng)直至產(chǎn)卵，觀察3種嗜尸性蠅類在貴陽地區(qū)夏季自然條件下各發(fā)育階段的歷期并記錄溫、濕度。2.于貴州醫(yī)科大學(xué)室外放置實(shí)驗(yàn)用家兔尸體，采集棕尾別麻蠅進(jìn)行人工飼養(yǎng)。待其產(chǎn)下幼蟲至化蛹后，每24 h收集一次蠅蛹，每次2粒，直至羽化出成蟲，選取第1、5、10天收集的蠅蛹，提取總RNA測(cè)序進(jìn)行文庫構(gòu)建，使用軟件edgeR對(duì)基因差異表達(dá)進(jìn)行分析，

3、篩選差異基因做實(shí)時(shí)熒光定量驗(yàn)證，對(duì)已知基因（Unigene）進(jìn)行京都數(shù)據(jù)庫（KEGG）代謝通路分析，使用MISA對(duì)Unigene進(jìn)行簡單重復(fù)序列(SSR)檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.臺(tái)灣別麻蠅6月、7月、8月發(fā)育歷期為17.00d、15.19d、15.7d；廄腐蠅6月、7月發(fā)育歷期為16.13d、13.9d；瘦葉帶綠蠅7月發(fā)育歷為13.06d。其中廄腐蠅與瘦葉帶綠蠅在7月發(fā)育歷期相似；廄腐蠅6月、7月發(fā)育歷期時(shí)間和臺(tái)灣別麻蠅

4、6月與7月、8月發(fā)育歷期有差異。統(tǒng)計(jì)出3種嗜尸性蠅類的發(fā)育總歷期和積溫的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。2.獲得各分組樣品基因組表達(dá)水平，共捕獲38727條Unigenes，將不同時(shí)間的蠅蛹轉(zhuǎn)錄組結(jié)果構(gòu)建數(shù)據(jù)庫進(jìn)行兩兩比較，差異基因總數(shù)為5283，將差異表達(dá)基因進(jìn)行可視化散點(diǎn)圖和火山圖構(gòu)建以及模式聚類構(gòu)建，對(duì)差異基因GO分類統(tǒng)計(jì)和富集分析并將差異性明顯的酪氨酸羥化酶（TH）基因與CBM-14基因篩選出來做實(shí)時(shí)熒光定量與測(cè)序結(jié)果一致。棕尾別麻蠅蛹轉(zhuǎn)錄組共有88

5、56個(gè) Unigene被注釋，被注釋的代謝通路有336個(gè)。SSR查找發(fā)現(xiàn)，從Unigene中共查找到SSR位點(diǎn)占總比例的22.32%。其中，單核苷酸重復(fù)所占比例最高，其次是三核苷酸重復(fù)。SSR不同重復(fù)基元類型中，出現(xiàn)頻率最高的為A/T，其次是AAC/GTT，AC/GT。
　　結(jié)論：
　　1.廄腐蠅、臺(tái)灣別麻蠅、瘦葉帶綠蠅的發(fā)育歷期與溫度變化有關(guān)，并獲得三種嗜尸性蠅類的生活史數(shù)據(jù)。2.構(gòu)建貴陽地區(qū)棕尾別麻蠅蛹3個(gè)不同發(fā)育時(shí)間的