艱難梭菌多位點序列分型及感染危險因素的流行病學.pdf

1、目的:
　　1、研究某三級甲等醫(yī)院重癥監(jiān)護室(ICU)抗生素相關性腹瀉（AAD）患者艱難梭菌檢出情況，艱難梭菌毒素攜帶特征，同時使用多位點序列分型(MLST)、隨機引物PCR分析（RAPD），了解本地區(qū)艱難梭菌的基因型別，主要流行菌株，并以MLST為參考，比較RAPD方法是否適合艱難梭菌分型。本研究數據可與國際上其他地區(qū)流行菌株進行比較并補充艱難梭菌MLST數據庫。
　　2、研究AAD患者中艱難梭菌相關性腹瀉(CDAD)的構

2、成比，CDAD患者在ICU住院患者的發(fā)病率，并通過多因素分析比較非艱難梭菌導致的AAD與CDAD患者在感染危險因素方面的差異。為臨床治療、預防、監(jiān)測CDAD，并制定合理的防治方案提供數據支持。
　　方法:
　　對2013年6月-2014年2月期間，某院綜合ICU、神經內科ICU、神經外科ICU、呼吸ICU發(fā)生AAD的患者取大便標本使用CDMN選擇性培養(yǎng)基進行厭氧培養(yǎng)。通過常規(guī)培養(yǎng)+分子生物學技術鑒定艱難梭菌。隨后對其A、B毒

3、素基因tcdA、tcdB，二元毒素基因cdtA、cdtB進行擴增，了解毒素攜帶情況。對艱難梭菌7個管家基因進行擴增、測序，通過MLST數據庫獲得基因ST型，采用RAPD方法對艱難梭菌進行分型，cross checker得出矩陣，NTsys2.10e軟件clustering功能分析得出的樹狀圖。使用bionumerics軟件對MLST和RAPD數據及艱難梭菌基本信息構建復合樹狀圖，并進行兩種方法的比對。以ICU患者住院日為分母，醫(yī)療機構發(fā)

4、生的醫(yī)院感染CDAD（HOHA CDAD）患者數為分子，得出CDAD發(fā)病率。通過填寫艱難梭菌感染患者調查表，并使用Epidate錄入數據，使用SPSS13.0對數據進行分析，對單因素計量資料采用t檢驗，計數資料采用卡方檢驗，對多因素采用Backward: LR法進行逐步Logistic回歸分析。
　　結果:
　　1.從4個ICU的394例患者725份標本中共分離出40株艱難梭菌，其中32株來源于非重復患者標本，主要來自于綜合

5、ICU12株，神經內科ICU23株，神經外科ICU5株，呼吸ICU未檢測到艱難梭菌。有25株檢測出tcdA，33株檢測出tcdB，艱難梭菌毒素A+B+菌株25株，占62.50％，A-B+菌株8株，占20.00％，A-B-菌株7株，占17.50％，未檢測出A+B-菌株。檢測到一株cdtA和cdtB基因陽性艱難梭菌。
　　2.40株艱難梭菌經MLST分析共分為9個ST型，來源于3個clade， ST54（9株）、ST39（7株）、ST

6、26（6株）、ST3(4株)、ST37（3株）、ST35（2株）、ST48（2株）、ST2（2株），ST17、ST201、ST33、ST133分別為1株，其中ST201，clade3為二元毒素陽性菌株。另外本研究中發(fā)現一株新的ST型別，經提交MLST數據核實為ST274。RAPD基因指紋圖譜分型，共有27個型別，其中最常見的為R20型，共有5株，其次為R13型4株，R6有3株，其余型別均有1-2株。將RAPD指紋圖譜與ST型進行聚類分析

7、，發(fā)現R20型對應的ST型別為ST26，R13對應ST54，R6對應ST37，由于存在單個條帶的差異，ST39分布在R1-R5之間，而R1-R5相互之間是亞型的關系。
　　3.HOHA CDAD發(fā)病率為16.60/10，000住院日，其中神內ICU的HOHA CDAD發(fā)病率為42.82/10，000住院日，CDAD占AAD患者構成比為8.12％(32/394)。
　　4.CDAD與AAD中非CDAD患者對比，經單因素分析，過

8、去一個月使用抗生素(x2值=12.30，P=0.00)、胃腸外營養(yǎng)(x2值=4.72，P=0.03)、腹瀉前住院天數(t=-2.12，P=0.03)，腹瀉前使用抗生素天數(t=-1.99，P=0.05)4個危險因素。經多因素Logistic回歸分析，一月前使用抗生素，腹瀉前的住院天數，是導致住院患者CDAD的危險因素。其中一月前使用抗生素對未使用抗生素導致CDAD的發(fā)病比數比例高達7.30倍，腹瀉前住院天數每增加一個等級CDAD的發(fā)病比