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文檔簡介
1、人體頭發(fā)由于其采樣無創(chuàng)性、時序性、長效性和易于保存等優(yōu)點,在疾病的長期監(jiān)測、疾病進程和發(fā)病機制研究方面具有獨特優(yōu)勢,越來越受到研究者的關(guān)注。已有頭發(fā)代謝組學(xué)技術(shù)應(yīng)用到疾病的診斷和發(fā)病機制的研究中,但相關(guān)研究報道還不多,因此,建立靈敏、可靠的頭發(fā)代謝組學(xué)分析技術(shù),對于拓展頭發(fā)在疾病研究中的作用有著十分重要的意義。
本論文以頭發(fā)為研究對象,重點突破頭發(fā)前處理技術(shù),充分富集不同類型內(nèi)源性化合物,建立涵蓋脂質(zhì)代謝、激素代謝網(wǎng)絡(luò)核心代謝
2、物的頭發(fā)靶向脂質(zhì)代謝組學(xué)分析技術(shù),并應(yīng)用于罕見的庫欣病臨床頭發(fā)樣本,準確、高效地分析頭發(fā)的代謝物輪廓,探索與疾病相關(guān)的潛在生物標志物,為臨床診斷和預(yù)后評價提供無創(chuàng)的監(jiān)測指標信息。
針對人體頭發(fā)中的脂質(zhì)化合物,優(yōu)化了頭發(fā)洗滌試劑、提取方法和片段長度,建立了簡便易行的前處理方法:采用植物香波-正己烷對頭發(fā)進行洗滌,晾干后剪碎成5mm片段,采用氯仿-甲醇浸提法,從30mg頭發(fā)中同時提取鞘脂、甘油酯和甘油磷脂類化合物,采用高效液相色譜
3、-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)靶向表征頭發(fā)中鞘脂類化合物,并對檢測到的鞘脂類化合物進行定量分析;采用高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對頭發(fā)甘油酯和甘油磷脂類化合物進行表征,并對檢測到的脂類化合物同時進行定量分析。對所建立的方法進行了方法驗證,對于鞘脂化合物,線性范圍為0.50-160pmol/mg或0.05-16pmol/mg,線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99;定量限(LOQ)為0.05-0.50pmol/mg,檢測限(LOD)為0.012
4、5pmol/mg;日內(nèi)精密度均小于14.9%,日間精密度均小于16.7%,準確度在80.2-119%之間,提取回收率在79.6-104%之間,基質(zhì)效應(yīng)在80.5-119%之間。對于甘油酯和甘油磷脂化合物,線性范圍為0.50-100pmol/mg,線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99;定量限(LOQ)為0.50pmol/mg,檢測限(LOD)為0.125-0.25pmol/mg;日內(nèi)精密度均小于20.1%,日間精密度均小于17.3%,準確度在8
5、0.0-120%之間,提取回收率在80.7-99.9%之間,基質(zhì)效應(yīng)在86.9-118%之間,驗證結(jié)果表明所建立分析方法能夠滿足人體頭發(fā)中脂質(zhì)類化合物分析要求。將所建立的方法應(yīng)用于不同性別的人體頭發(fā)樣本,成功表征了32種鞘脂類化合物、72種甘油脂類化合物和2種甘油磷脂類化合物,并測定了含量,發(fā)現(xiàn)了性別相關(guān)的29種差異性化合物,并探究了頭發(fā)發(fā)干至發(fā)梢方向各類內(nèi)源性脂質(zhì)化合物含量的變化趨勢。
針對人體頭發(fā)中的激素化合物,優(yōu)化了洗滌
6、試劑、提取方法和片段長度,建立了簡單易行的前處理方法:采用植物香波-正己烷對頭發(fā)進行洗滌,晾干后,剪碎成5mm片段,采用甲醇18小時浸提法,從30mg頭發(fā)中提取激素化合物。優(yōu)化了課題組已建立的血漿激素超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用分析方法,增加激素化合物的分析通量由20種至28種。對所建立的激素分析方法進行了方法驗證,線性范圍為0.25-100pg/mg或0.05-20pg/mg,線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99;定量限(LOQ)為0
7、.05-0.25pg/mg,檢測限(LOD)為0.05-0.1pg/mg;日內(nèi)精密度均小于17.9%,日間精密度均小于16.5%,準確度在79.5-115%之間,提取回收率在77.1-106%之間,基質(zhì)效應(yīng)除醛固酮(127-134%)和17-OH PROG(67.6-72.%)外,其余化合物在81.5%-119%之間,方法驗證結(jié)果表明所建立方法能夠滿足人體頭發(fā)中激素類化合物的表征和定量分析要求。將所建立的方法應(yīng)用于不同性別的人體頭發(fā)樣本
8、,成功表征了17種激素化合物,并測定了含量,發(fā)現(xiàn)了性別相關(guān)的5種差異性化合物,并探究了頭發(fā)發(fā)干至發(fā)梢方向激素化合物含量的變化趨勢。
本論文將所建立的頭發(fā)脂質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)應(yīng)用于庫欣病人與非庫欣病對照組臨床頭發(fā)樣本,在庫欣病人頭發(fā)中檢測到17種激素、33種鞘脂、100種甘油酯、4種磷脂,按照投影中的變量重要性值(VIP)大于1,并同時滿足T檢驗具有顯著性差異的標準,共找到表征庫欣病人與非庫欣病對照組差異的40種潛在生物標志物,包括
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