長鏈非編碼RNA H19和HOTAIR在宮頸癌外周血中的表達及其臨床意義.pdf

1、研究背景:宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一，隨著HPV病毒感染和宮頸細胞學這兩個宮頸癌篩查的應(yīng)用，增加了發(fā)現(xiàn)癌前病變并進行早期治療的機會，并能夠顯著降低宮頸癌的發(fā)生率和死亡率。因此，宮頸癌早期診斷的檢測非常重要?，F(xiàn)已有不少研究證實在不同類型癌癥患者的血清或血漿中可以檢測到特異性的分子。其中部分研究表明使用循環(huán)生物標志物有助于對宮頸癌高風險患者的早期識別，但現(xiàn)在對宮頸癌循環(huán)標記物的認識還處于初級階段。
　　長鏈非編碼RNAs（lon

2、g non-coding RNAs，LncRNAs）現(xiàn)已成為研究熱點，其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。LncRNAs是長度超過200nt的一類RNA分子，由于其缺少開放閱讀框架而不具有編碼蛋白質(zhì)潛能，所以最初被視作轉(zhuǎn)錄過程的“暗物質(zhì)”而未受到重視。但近來有大量研究表明，LncRNAs參與機體各種調(diào)節(jié)過程如生長發(fā)育、細胞的增殖、分化和凋亡等，并與多種腫瘤、神經(jīng)障礙性疾病、感染性疾病以及心腦血管疾病等密切相關(guān)。閱讀相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)有不少研

3、究表明，一些LncRNAs可能在宮頸癌發(fā)病機理中起著重要作用例如H19、HOTAIR、SRA、LincRNA-p21、UCA1、MALAT-1、ANRIL、BCYRNI等。
　　已有研究表明從血漿中分離獲得的外泌體中除有大量的miRNA外，還有一些LncRNAs（約占3.36％），這為外周血中存在LncRNAs提供了直接依據(jù)。一些LncRNAs可在某些腫瘤或心血管疾病患者血清（血漿）中穩(wěn)定表達，并可作為循環(huán)診斷標志物，如宮頸癌的L

4、ncRNA-PVT1、乳腺癌的LncRNA-H19，結(jié)腸癌的LncRNA-HOTAIR，肝癌的LncRNA-HEIH，心肌梗死的LncRNA-LIPCAR。
　　目的:探討長鏈非編碼RNA H19和HOTAIR在宮頸癌外周血中的表達及其臨床意義。
　　研究方法:1、收集2016年1-10月，52例宮頸癌術(shù)前以及39例因婦科良性疾病入院宮頸癌篩查正?；颊咄庵苎?ml。其中10例宮頸癌患者行術(shù)前、術(shù)后對比。所選病例均經(jīng)病理診斷證

5、實，術(shù)前均未行任何治療。
　　2、對收集的血清標本進行Total RNA提取和純化。實時熒光定量PCR檢測LncRNAs的表達，并繪制擴增曲線以及溶解曲線，記錄獲得的各樣本的CT值。
　　3、數(shù)據(jù)分析:
　　1) Excel表格分析目的基因的相對表達量。相對定量的計算公式為:foldinducation=2-△△Ct。fold inducation得出的結(jié)果是實驗組目的基因的相對表達量。ΔΔCt=宮頸癌組（Ct目的基因

6、-Ct內(nèi)參基因）-對照組（Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因）
　　2)應(yīng)用SPSS21.0軟件分析實驗數(shù)據(jù)，用非參數(shù)檢驗Mann-Whitney U分析宮頸癌患者和對照組血清樣本LncRNA H19、HOTAIR表達水平差異，宮頸癌術(shù)前、術(shù)后H19和HOTAIR表達水平對比，并和宮頸癌患者臨床病理資料進行相關(guān)性分析，根據(jù)血清LncRNA H19和HOTAIR表達水平繪制受試者工作曲線(receiveroperating characte

7、ristic curve，ROC)。以P＜0.05（雙側(cè)）為有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果:1、血清樣本實驗組共抽提獲得52個Total RNA樣本，對照組共抽提獲得39個Total RNA樣本。2、所有樣本進行實時定量RT-PCR，應(yīng)用SPSS21.0軟件進行數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析，結(jié)果顯示，血清LncRNA H19、HOTAIR在宮頸癌患者的表達水平顯著高于對照組(P＜0.01)，血清H19、HOTAIR術(shù)后較術(shù)前表達水平顯著降低(P＜0