西羅莫司治療難治性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血的臨床療效及其作用機(jī)制的體外探索性研究.pdf

1、純紅細(xì)胞再生障礙性貧血(pure red cell aplasia anemia，PRCA)是以嚴(yán)重網(wǎng)織紅細(xì)胞減少及骨髓中紅系前體細(xì)胞顯著減低為特征的貧血綜合征。分為先天性及后天獲得性PRCA。原發(fā)性獲得性PRCA是一種免疫機(jī)制干擾紅系分化的自身免疫性疾病，目前對于獲得性PRCA的主要治療方法是環(huán)孢素±激素為主的免疫調(diào)節(jié)治療。然而，部分患者存在環(huán)孢素、激素?zé)o效或不耐受，需采用二線治療，常用的二線治療包括環(huán)磷酰胺、CD20單抗、ATG等，

2、但這些治療有些價格非常昂貴，且副作用大，患者難以承受，部分患者依然無效。因此對于難治性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血患者，需要找到一種新的有效治療方法。西羅莫司是一種免疫抑制劑，目前主要用于移植后病人的免疫調(diào)節(jié)治療;與環(huán)孢素相比，有較小的肝腎毒性。既往國內(nèi)外多篇文獻(xiàn)報道西羅莫司可治療復(fù)發(fā)難治自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolytic anemia，AIHA)，Evans綜合征及自身免疫性淋巴增生綜合征(autoimmune

3、lymphoproliferative syndrome，ALPS)等免疫功能紊亂性疾病，且效果良好。在本研究中，我們對于環(huán)孢素?zé)o效或不耐受的難治性PRCA患者，采用西羅莫司治療，觀察其有效率及副反應(yīng)，并對可能的作用機(jī)制進(jìn)行了探索。
　　目的：
　　明確西羅莫司治療難治性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血患者的臨床療效及不良反應(yīng)。進(jìn)一步觀察西羅莫司治療前后難治性PRCA患者Treg變化及西羅莫司體外對K562細(xì)胞系和病人原代干細(xì)胞向紅系

4、分化的影響，明確西羅莫司起效的可能機(jī)制。
　　方法：
　　回顧性收集自2014年3月至2017年3月北京協(xié)和醫(yī)院血液科采用西羅莫司治療的14例難治性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血患者的臨床資料并進(jìn)行整理，觀察西羅莫司的治療療效及不良反應(yīng)。
　　通過流式檢測PRCA患者治療前CD4+CD25+foxP3+（Treg細(xì)胞），以及CD4+T的表達(dá)量，比較患者與正常人群中Treg細(xì)胞水平表達(dá)情況，動態(tài)隨訪這些PRCA患者在西羅莫司治療

5、前后Treg變化情況。定向體外培養(yǎng)K562細(xì)胞系及治療前PRCA患者骨髓干/祖細(xì)胞，使之向紅系分化，加入西羅莫司，觀察西羅莫司對紅細(xì)胞分化的影響。在患者的培養(yǎng)體系中，分別加入患者血清和不同濃度的西羅莫司，觀察紅細(xì)胞集落生長的變化。
　　結(jié)果：
　　西羅莫司治療難治性PRCA的總有效率為85.7％，中位起效時間為4個月，不良反應(yīng)發(fā)生率為57.1％;與正常對照相比，PRCA患者外周血中Treg細(xì)胞明顯下降，經(jīng)治療后Treg較治療

6、前上調(diào);體外培養(yǎng)K562細(xì)胞株，不同濃度梯度西羅莫司作用后對血紅蛋白生成影響不顯著，對紅系表面抗原表達(dá)影響不顯著;PRCA患者體外紅系集落生長與正常人無異，無論正常人或PRCA患者，加入西羅莫司組與未加藥物的對照組比較，集落生長無顯著性差異;PRCA患者加入自身血清后，其紅細(xì)胞集落生長較未加血清者明顯減少，再次加入不同濃度的西羅莫司后，在1000nM和100nM組，觀察到紅系集落較未加西羅莫司組明顯增加。
　　結(jié)論：
　　西