mfat-1基因?qū)β然捳T導(dǎo)的成體神經(jīng)干細(xì)胞缺氧性損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、研究背景:隨著人們生活方式和飲食習(xí)慣的改變，缺血性腦卒中已經(jīng)成為成年人致死致殘以及神經(jīng)功能損傷的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)缺血性腦卒中占腦卒中的比例已超過80％，然而現(xiàn)在臨床仍然缺乏有效的治療手段。成體神經(jīng)干細(xì)胞替代性治療方法在神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)治療方面將有廣闊的應(yīng)用前景。但是，成體神經(jīng)干細(xì)胞替代療法應(yīng)用于缺血性腦卒中臨床治療的最大障礙是在缺血半暗帶區(qū)缺血缺氧的微環(huán)境對(duì)成體神經(jīng)干細(xì)胞活性和功能的損傷。所以，能否找到一種保護(hù)缺血半暗帶區(qū)成體

2、神經(jīng)干細(xì)胞免受缺血缺氧性損傷的方法是成體神經(jīng)干細(xì)胞替代療法臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。
　　目的:通過建立成體神經(jīng)干細(xì)胞體外缺血缺氧性損傷模型，探討mfat-1基因是否對(duì)氯化鈷誘導(dǎo)的成體神經(jīng)干細(xì)胞缺氧性損傷具有保護(hù)作用，同時(shí)進(jìn)一步研究其內(nèi)在機(jī)制，為成體神經(jīng)干細(xì)胞替代療法的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
　　方法:mfat-1轉(zhuǎn)基因小鼠和其同窩陰性小鼠飼養(yǎng)至8-12周齡，基因型鑒定完成后，無菌環(huán)境下提取兩組小鼠大腦Subventricularzone

3、(SVZ)區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞，培養(yǎng)至第三代用于以下實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞免疫組化鑒定神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志蛋白Nestin，通過氣相色譜技術(shù)分別測(cè)定mfat-1組及同窩陰性組鼠腦和神經(jīng)干細(xì)胞n-3/n-6的比值。通過氯化鈷誘導(dǎo)體外構(gòu)建成體神經(jīng)干細(xì)胞缺血缺氧模型;通過測(cè)定兩組細(xì)胞的細(xì)胞活性，細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞增殖率來研究mfat-1基因?qū)Τ审w神經(jīng)干細(xì)胞體外缺氧性損傷的保護(hù)作用。為了進(jìn)一步探究mfat-1基因的作用機(jī)制，我們分別測(cè)定了兩組細(xì)胞活性氧水平以及谷胱甘肽表達(dá)

4、水平，確定了mfat-1基因的保護(hù)機(jī)制是通過促進(jìn)抗氧化應(yīng)激損傷來完成的。我們選取了抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵信號(hào)通路Nrf2/ARE信號(hào)通路，分別檢測(cè)了Nrf2及下游基因HO-1、NQO-1、GCLC mRNA表達(dá)水平以及蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:mfat-1基因可以增強(qiáng)氯化鈷誘導(dǎo)的缺氧性損傷中成體神經(jīng)干細(xì)胞的細(xì)胞活性，與此同時(shí)抑制氯化鈷介導(dǎo)的成體神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡。通過BrdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)表明，在氯化鈷誘導(dǎo)的體外缺氧損傷模型中，mfat-1組的

5、細(xì)胞增殖率明顯高于同窩陰性對(duì)照組?；钚匝跛揭约凹?xì)胞谷胱甘肽表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果顯示mfat-1組細(xì)胞活性氧水平明顯低于同窩陰性對(duì)照組，同時(shí)谷胱甘肽表達(dá)量明顯高于同窩陰性對(duì)照組。實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示Nrf2及其下游基因的mRNA的表達(dá)量均高于同窩陰性對(duì)照組。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示Nrf2及其下游基因HO-1、NQO-1、GCLC的蛋白表達(dá)量均高于對(duì)照組。
　　結(jié)論:fat-1基因?qū)β然捊閷?dǎo)的成體神經(jīng)干細(xì)胞缺氧性損