FAM83D促進(jìn)肺腺癌惡性進(jìn)展及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:FAM83D在肺腺癌中的表達(dá)特征及臨床意義的探索
　　[目的]肺癌是目前世界上發(fā)病人數(shù)及死亡人數(shù)最多的惡性腫瘤。近年來(lái)，肺腺癌發(fā)病率增長(zhǎng)迅速，甚至已超過(guò)肺鱗癌成為非小細(xì)胞肺癌最主要的病理類型。有研究表明，F(xiàn)AM83家族（Family with sequence similarity83）與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。本研究旨在探索FAM83D成員在肺腺癌中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與臨床病理分期間的關(guān)系以及與肺腺癌患者預(yù)后之間

2、的相關(guān)性。
　　[方法]應(yīng)用腫瘤基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA)肺腺癌數(shù)據(jù)庫(kù)驗(yàn)證FAM83D在肺腺癌組織中表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，且運(yùn)用Cox回歸分析探索了FAM83D表達(dá)與肺腺癌患者總體生存之間的關(guān)系。后選取了江蘇省腫瘤醫(yī)院胸外科60例肺腺癌和癌旁正常組織標(biāo)本，使用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)方法與免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）染色的方法

3、檢測(cè)FAM83D的表達(dá)情況并分析其表達(dá)與臨床病理表現(xiàn)的關(guān)系。
　　[結(jié)果]TCGA肺腺癌數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果顯示:FAM83D在肺腺癌組織中的表達(dá)顯著高于對(duì)應(yīng)的癌旁正常肺組織，卡方檢驗(yàn)顯示FAM83D高表達(dá)與年齡沒(méi)有相關(guān)性(p=0.3164)，但與更大的原發(fā)腫瘤(p＜0.0001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(p=0.0049)以及更高的TNM分期(p＜0.0001)正相關(guān)。Kaplan-Meier生存分析顯示，腫瘤組織FAM83D高表達(dá)相較于低表達(dá)組

4、，生存明顯下降(HR=1.890，p=0.0003)。綜合FAM83D表達(dá)水平、性別、T分期、N分期以及TNM分期等臨床參數(shù)，多因素Cox回歸分析提示，F(xiàn)AM83D高表達(dá)(p=0.006)與更高階的TNM分期(p=0.012)是兩個(gè)影響肺腺癌病人總體生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。
　　[結(jié)論]FAM83D在肺腺癌組織中高表達(dá)，且肺腺癌組織FAM83D高表達(dá)提示著不良的預(yù)后。FAM83D可能參與了肺腺癌的惡性進(jìn)展。
　　第二部分:FAM

5、83D在肺腺癌中體內(nèi)外功能實(shí)驗(yàn)和相關(guān)機(jī)制的探索
　　[目的]
　　FAM83D可能是一個(gè)潛在的促進(jìn)肺腺癌惡性表型的促癌基因。本研究旨在探討FAM83D蛋白在肺腺癌中的表達(dá)，并分析其與肺腺癌惡性表型的關(guān)系及其潛在的調(diào)控機(jī)制，為肺腺癌的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。
　　[方法]
　　1.使用qRT-PCR方法和western blot法分別檢測(cè)肺腺癌細(xì)胞系中FAM83D的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　2.設(shè)計(jì)特異s

6、iRNA干擾FAM83D的表達(dá)，體外功能實(shí)驗(yàn)探討FAM83D對(duì)腫瘤增殖、遷移能力及細(xì)胞周期、凋亡的影響。
　　3.體內(nèi)裸小鼠移植瘤模型實(shí)驗(yàn)觀察FAM83D的干擾對(duì)肺腺癌細(xì)胞在裸小鼠皮下生長(zhǎng)的影響。
　　4.運(yùn)用KEGG通路分析及GO富集分析預(yù)測(cè)FAM83D發(fā)揮作用的可能通路。
　　5.使用qRT-PCR方法和western blot法檢測(cè)沉默F(xiàn)AM83D后相關(guān)細(xì)胞周期蛋白的的mRNA和蛋白的表達(dá)情況變化。
　　6

7、.進(jìn)行拯救實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證FAM83D與潛在靶基因的上下游關(guān)系。
　　[結(jié)果]
　　1.FAM83D在肺腺癌細(xì)胞系的表達(dá)明顯高于肺上皮正常細(xì)胞。沉默F(xiàn)AM83D后A549和H1299細(xì)胞株的增殖、遷移和侵襲能力明顯降低，并使細(xì)胞周期阻滯在G1期。
　　2.裸小鼠荷瘤實(shí)驗(yàn)顯示，沉默F(xiàn)AM83D后腫瘤的生長(zhǎng)速度及體積均小于對(duì)照組。對(duì)移植瘤進(jìn)行免疫組化染色顯示，沉默F(xiàn)AM83D的實(shí)驗(yàn)組的Ki-67染色低于對(duì)照組(p＜0.05)

8、。
　　3.qRT-PCR和western blot結(jié)果顯示，沉默F(xiàn)AM83D后，細(xì)胞周期蛋白CCND1與CCNE1的表達(dá)也受到了明顯的抑制，而其它的細(xì)胞周期調(diào)控基因的表達(dá)沒(méi)有顯著差異。
　　4.在沉默F(xiàn)AM83D的肺腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)CCND1或CCNE1可以部分拯救減弱的惡性表型。
　　[結(jié)論]
　　我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示FAM83D在肺腺癌細(xì)胞系中高表達(dá)，可促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖和遷移侵襲能力。FAM83D可能通過(guò)