miR-129-2基因啟動(dòng)子甲基化與喉癌的關(guān)系.pdf

1、喉癌是頭頸部最常見的腫瘤，喉癌的發(fā)生發(fā)展目前尚無明確病因，可能是由下列多種因素共同作用導(dǎo)致，主要有吸煙、飲酒、病毒感染、性激素、職業(yè)暴露等有關(guān)。喉鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生是個(gè)多因素互相作用并共同參與、長期的、復(fù)雜的連續(xù)過程。盡管人們對喉癌的影響因素和分子機(jī)制有了一定的了解，喉癌治療的五年生存率仍低于50％，喉癌的最常見病理分型為鱗狀細(xì)胞癌，喉癌的早期診斷及喉癌復(fù)發(fā)的早期判斷對喉鱗癌的治療及預(yù)后至關(guān)重要,而目前人們對于相關(guān)的分子機(jī)理及分子標(biāo)志的認(rèn)

2、識還很有限。基因甲基化是表觀遺傳學(xué)中的一種，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，幾乎所有的 DNA甲基化都發(fā)生在 CpG島胞嘧啶，研究證實(shí)，啟動(dòng)子區(qū) CpG島異常甲基化是最多見的生物學(xué)標(biāo)志之一，可能對癌癥治療包括早期癌癥檢測，表觀遺傳學(xué)腫瘤分類，預(yù)測腫瘤預(yù)后，治療干預(yù)等有很大幫助。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系。喉癌組織中有多種 miRNAs異常表達(dá)。MicroRNAs是一系列小的非編碼 RNAs,通過調(diào)節(jié)目標(biāo)基因的表達(dá)而引起mRN

3、A的表達(dá)下降或抑制mRNA轉(zhuǎn)錄。miR-129-2是微小RNA中的一員,其基因位于染色體11p11.2。己有研究報(bào)道, miR-129-2的異常表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌、膀胱癌、胃癌等許多人類腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。但是miR-129-2與 LSCC關(guān)系的研究卻較為少見.為了深入理解喉鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生及發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)理,尋找鑒定相應(yīng)的分子生物學(xué)指標(biāo)志，為進(jìn)一步治療喉癌奠定基礎(chǔ)。本文將對miR-129-2與喉鱗癌的關(guān)系作進(jìn)一步的研究。
　　

4、目的
　　1.研究miR-129-2基因啟動(dòng)子在喉癌組織和匹配癌旁組織，以及喉癌細(xì)胞系的甲基化狀態(tài)。
　　2.研究 miR-129-2在喉癌組織的表達(dá)水平及 miR-129-2甲基化與其表達(dá)水平的關(guān)系。
　　3.miR-129-2過表達(dá)對喉癌細(xì)胞增殖的影響。
　　方法
　　采用甲基化敏感性特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MSRE-qPCR）的方法測定喉癌細(xì)胞系Hep-2細(xì)胞和29對喉癌組織和癌旁組織中miR-129-2

5、基因的甲基化水平。每一標(biāo)本的 HM（甲基化強(qiáng)度）≥10%定義為發(fā)生甲基化。0%　　采用熒光定量PCR方法測定喉癌患者癌組織及匹配的癌旁組織中miR-129-2基因的 mRNA表達(dá)水平,以β-actin作為內(nèi)參基因。通過測定樣本中目的基因miR-129-2模板的Ct值來反應(yīng)模板的含量。對每一個(gè)樣本，用ΔCt(Ctmir129-2-Ctβ-actin)值表示目的基因與內(nèi)參基因間的 Ct差值。應(yīng)用去甲基化

6、藥物分析甲基化對喉癌細(xì)胞中 miR-129-2基因表達(dá)的影響。最后利用 MTT實(shí)驗(yàn)在喉癌細(xì)胞系中驗(yàn)證miR-129-2對腫瘤相關(guān)特性的影響。
　　結(jié)果
　　1.熒光定量PCR檢測甲基化結(jié)果
　　結(jié)果顯示，miR-129-2啟動(dòng)子區(qū)在喉癌細(xì)胞系Hep-2細(xì)胞中發(fā)生了甲基化。在喉癌組織中 miR-129-2甲基化頻率為58.62%（17/29），在癌旁組織未發(fā)生miR-129-2甲基化.
　　2.miR-129-2在

7、喉癌組織及癌旁組織的表達(dá)水平
　　喉癌組織中miR-129-2表達(dá)水平低于癌旁組織（P<0.05）.
　　3.喉癌細(xì)胞系去甲基化處理結(jié)果
　　Hep-2細(xì)胞系在去甲基化和去乙?；幬锾幚砗笈c空白對照相比， miR-129-2的表達(dá)明顯增高。
　　4.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　Hep-2細(xì)胞中過表達(dá)miR-129-2基因后，與轉(zhuǎn)入空載質(zhì)粒對比，細(xì)胞的生長明顯受到抑制。
　　結(jié)論
　　1.miR-129-