低滲透壓通過(guò)促進(jìn)板狀偽足的形成加速細(xì)胞缺口的關(guān)閉.pdf

1、目的:通過(guò)PDMS微柱法建立細(xì)胞傷口愈合模型，通過(guò)對(duì)比等滲透壓，研究低滲透壓對(duì)細(xì)胞缺口愈合的影響，研究低滲透壓對(duì)細(xì)胞遷移速度、細(xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)及板狀偽足的影響，并對(duì)低滲透壓對(duì)細(xì)胞缺口關(guān)閉的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法:實(shí)驗(yàn)細(xì)胞MDCK細(xì)胞（犬腎上皮細(xì)胞），隨機(jī)分為低滲組(n=5)和等滲組(n=6)作延時(shí)拍攝觀(guān)察細(xì)胞運(yùn)動(dòng);用深反應(yīng)離子刻蝕法制作好圓形微陣列凹槽的硅片板，深100μm，直徑180μm。往硅片板上灌注1∶10PDMS，

2、加熱后切下即可造好PDMS微柱模具。消毒PDMS微柱模具后，往模具下方種下MDCK細(xì)胞，待單層細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)后，拔出柱子即在單層細(xì)胞中造出直徑180微米的缺口?；罴?xì)胞工作站下(37℃，5％CO2)，顯微鏡下連續(xù)延時(shí)定點(diǎn)拍照，5分鐘拍一張，獲得圖片后分析低滲透壓(～150mOsm)和等滲透壓(～300mOsm)條件下細(xì)胞缺口關(guān)閉速度、偽足面積伸出的情況。此外，MDCK細(xì)胞低滲透壓和等滲透壓條件下分別處理15分鐘后，固定細(xì)胞，并做熒光染色，觀(guān)察不

3、同滲透壓下細(xì)胞肌動(dòng)蛋白環(huán)的形成情況。
　　結(jié)果:細(xì)胞缺口關(guān)閉過(guò)程邊緣曲線(xiàn)周長(zhǎng)變化圖中，可以看出低滲透下細(xì)胞缺口關(guān)閉比等滲壓下要快。計(jì)算速度后發(fā)現(xiàn)，低滲組細(xì)胞愈合速度3.93±1.04μm/min(n=5，mean±s.d.)，等滲組細(xì)胞愈合速度1.76±0.18μm/min(n=6，mean±s.d.)。細(xì)胞缺口關(guān)閉過(guò)程偽足伸出邊緣面積變化圖中，可以看出低滲透壓下板狀偽足要比等滲壓下的要明顯，低滲壓板狀偽足伸出面積1137.46±

4、70.26μm2(n=5，mean±s.d.)，等滲壓板狀偽足伸出面積60.44±21.87μm2(n=6，mean±s.d.)。等滲壓下可見(jiàn)肌動(dòng)蛋白環(huán)的形成，而低滲透壓下幾乎觀(guān)察不到。熒光光密度分析曲線(xiàn)圖中，等滲壓下在缺口邊緣出現(xiàn)了熒光光密度的波峰，而低滲透壓下沒(méi)有出現(xiàn)。
　　結(jié)論:1、低滲壓環(huán)境下，MDCK細(xì)胞傷口愈合速度比等滲透壓下的更加快。低滲透壓下的板狀偽足比等滲透壓下的更明顯，而低滲透壓下沒(méi)有形成肌動(dòng)蛋白環(huán)。