綠原酸的定量、類似物及衍生物的制備和生物活性研究.pdf

1、綠原酸是自然界廣泛存在并具有多種生物活性的天然產物，其含量是中藥茵陳質量控制的重要指標。茵陳為菊科植物茵陳蒿或濱蒿的地上干燥部分，始載于《神農本草經》，具有清熱利濕、利膽退黃的功效，現(xiàn)代藥理研究證實其還具有抗癌、抗炎和解熱鎮(zhèn)痛作用。中藥茵陳中含有綠原酸類、黃酮類及香豆素類等多種化學成分。本文建立了超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質譜聯(lián)用法(UPLC-MS/MS)以同時快速分析茵陳中包括綠原酸在內的6種成分的含量，并比較了不同采收時間、不同采集

2、部位及不同干燥方式處理后樣品中6種成分含量的變化，結果表明:茵陳藥材中綠原酸的含量顯著高于其它黃酮化合物。此外，在不同月份采集的樣品中，綠原酸含量的分布規(guī)律均呈現(xiàn):葉＞莖＞根，冷凍干燥處理＞蔭干處理，其中4月采集樣品經冷凍干燥處理后葉中綠原酸含量最高，為10.823μg/mg。其他5種黃酮成分的含量變化如3，5，3'，4'-四羥基-6，7-二甲氧基黃酮的含量在6月冷凍干燥樣品葉中含量最高;3'-甲氧基薊黃素及薊黃素在茵陳葉中的含量隨著時

3、間的推移逐漸升高;而金圣草黃素和鼠李檸檬素在茵陳藥材中的含量很低。此次建立的同時快速分析茵陳中包括綠原酸在內的6種成分的方法靈敏度和分辨率高、穩(wěn)定性強，為茵陳藥材質量控制提供了可借鑒的分析方法。
　　由于綠原酸分子結構中存在5個酚羥基和一個羧基，因此具有很高的親水性和較低的親脂性。本實驗采用生物轉化技術在改善綠原酸的親脂性方面做了研究。利用豬胰脂肪酶催化完成了綠原酸乙?；姆磻⒚鞒鲈撁复呋G原酸乙?；磻淖钸m反應條件，即選

4、取甲基叔丁基醚作為反應溶劑，乙酸乙烯酯作為?；w，在綠原酸∶乙酸乙烯酯=1∶6，脂肪酶100 mg，50℃條件下，綠原酸的乙?；a率最高。此外，將酶催化反應混合物用ODS進行分離純化，通過UPLC-MS/MS定性分析以及NMR結構確定，最終得到綠原酸的兩種乙酰化物即1-乙酰綠原酸和1，5-二乙酰綠原酸。
　　多年研究證明綠原酸具有很強的生物活性，但是由于其結構特殊性——酯鍵的存在，使其口服后僅有一小部分可以被完全吸收，而很大一部

5、分在體內水解，水解后的綠原酸許多生物活性消失。因此，迫切需要研究合成穩(wěn)定性更高的綠原酸類似物。本研究以奎尼酸二縮丙酮為起始原料，經過氧化、羥氨化、催化氫化、?；却罅繉嶒炑芯?，合成了穩(wěn)定性更高的綠原酸類似物，經過包括NOE在內的NMR分析、以及高分辨質譜的檢測，鑒定為3α-咖啡?？崴狨０?，該化合物不僅保留了綠原酸的抗氧化活性和抗HCV病毒活性，同時還有較高的穩(wěn)定性和較低的毒性。
　　為了驗證綠原酸類似物及衍生物的生物活性，找到活

6、性更優(yōu)的天然產物的類似物及衍生物，本文比較了6種化合物在清除DPPH自由基活性、抑制細胞內活性氧活性、過氧游離基誘導DNA氧化損傷的保護作用、抑制α-葡萄糖苷酶活性以及抑制二肽基肽酶活性等五個方面的活性。研究結果表明:綠原酸類似物3α-咖啡?？崴狨０吩谝种萍毎麅然钚匝趸钚苑矫鎯?yōu)于綠原酸，同時3α-咖啡酰奎尼酸酰胺、1-乙酰綠原酸和1，5-二乙酰綠原酸對過氧游離基誘導的DNA氧化損傷的保護作用也強于綠原酸。
　　盡管上述化合物在離