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文檔簡介
1、第一部分:含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質粒減毒沙門氏菌對大鼠大腸癌生長的影響
目的:研究減毒沙門氏菌(SL3261)為載體的CEACAM6聯(lián)合4-1BBL基因疫苗對實驗性大腸癌的抑制作用。
方法:實驗大鼠隨機分四組,每組6只,連續(xù)18周皮下注射1,2-二甲肼以建立大鼠大腸癌模型,同時于第8、10、12及14周每組分別灌服pIRES/SL3261、 pIRES-CEACAM6/SL3261、 pIRES-
2、4-1BBL/SL3261、pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261減毒沙門氏菌疫苗,濃度為109/ml的細菌2ml,第18周處死荷瘤大鼠,解剖并觀察大鼠大腸成瘤數(shù)量,收集大鼠大腸及脾臟組織,病理HE染色并評判腸道腫瘤Dukes分期,RT-PCR檢測大鼠脾臟細胞CMV基因。
結果:pIRES/SL3261空質粒組平均成瘤數(shù)為11.7±2.1個,明顯多于pIRES-4-1BBL/SL3261組(5.7±1.2個),
3、pIRES-CEACAM6//SL3261組(5.0±1.4個),pIRES-CEACAM64-1BBL/SL3261組(4.3±1.4個);Dukes分期分析,pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組5只為A期,1只為B-C期;pIRES-4-1BBL/SL3261組中3只為A期,3只為B-C期;pIRES-CEACAM6/SL3261中1只為A期,5只為B-C期;pIRES/SL3261組中4只為B-C期,2只為D期
4、。RT-PCR檢測各組脾臟均有CMV基因表達。
結論:各組疫苗菌可以將外源基因有效轉錄至大鼠體內并表達相關蛋白,含外源基因的疫苗菌均能抑制實驗性大腸癌的生長,以含雙基因疫苗菌的抑癌作用最強。
第二部分:含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質粒減毒沙門氏菌抑制大鼠大腸癌的機制研究——腫瘤局部免疫反應
目的:通過研究腫瘤組織內局部免疫反應分析雙基因疫苗抑制腫瘤生長機制。
方法:采用免疫組織化學
5、SP法檢測四組大腸腫瘤組織的CD3、CD4、CD8、CD56、CD45RO、Foxp3、CEACAM6、IL-4、IL-17并分別評測各組指標表達分值。
結果:與pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組CD3、CD8+、CD56+、CD45RO表達明顯增高(P<0.05),而 IL-4、IL-17和 FOXP3表達明顯下調(P<0.05),另外,pIRES-CEACAM6/SL3261組CD45RO表達較pIR
6、ES/SL3261組明顯增高(P<0.05)。
結論:含有CEACAM6和4-1BBL雙基因的重組減毒沙門氏菌可能通過提高CD3+CD8+T細胞和NK細胞的浸潤,減少Foxp3細胞表達,促進Th1極化,抑制Th2及Th17極化,誘導特異與非特異性免疫,并打破免疫抑制微環(huán)境的機制來抑制腸道腫瘤。
第三部分:含pIRES-CEACAM6-4-1BBL質粒減毒沙門氏菌抑制大鼠大腸癌的機制研究——全身免疫反應
目的
7、:通過研究脾臟組織免疫學指標分析雙基因疫苗抑制腫瘤生長的機制。
方法:采用免疫組織化學SP法檢測四組大腸腫瘤組織的IFN-γ、CD3、CD4、CD8、CD56、Foxp3、IL-4、IL-17并分別評測各組指標表達分值。
結果:與pIRES/SL3261組相比,pIRES-4-1BBL/SL3261組與pIRES-CEACAM6-4-1BBL/SL3261組IFN-γ、CD3、CD8+、CD56+表達明顯增高(P<0
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