骨硬化癥的臨床診斷及分子機制研究.pdf

1、目的：
　　回顧性分析已納入本研究但尚未進行基因診斷的9個骨硬化癥家系/（無家系）先證者的臨床資料；
　　對所有臨床診斷或者擬診常染色體顯性遺傳骨硬化癥的先證者進行CLCN7基因篩查。對于CLCN7基因篩查后未找到突變位點的先證者，再逐一篩查其余能導致骨硬化癥的致病基因；對所有擬診骨硬化癥合并腎小管酸中毒的先證者進行CAII基因篩查，確定其突變位點及突變類型。
　　對于臨床及基因均已確診的骨硬化癥先證者，對其相應的突變

2、蛋白進行功能預測，并嘗試探討其基因型和臨床表型的相關性。
　　方法：
　　收集自2008年起北京協(xié)和醫(yī)院內分泌科臨床診斷或擬診骨硬化癥的9個家系/（無家系）先證者。
　?、欧治?個骨硬化癥家系/（無家系）先證者的遺傳方式，臨床表現及影像學特征；
　?、茖?個骨硬化癥家系先證者/（無家系）先證者及其家系中的親屬進行基因突變檢測；擬診常染色體顯性遺傳骨硬化癥的先證者針對CLCN7基因進行PCR擴增測序；擬診常染色體隱

3、性遺傳骨硬化癥合并腎小管酸中毒的先證者針對CAII基因進行PCR擴增測序，如發(fā)現新的錯義突變則在50例無關健康人群中進行驗證；
　?、沁x取遺傳學已確診的錯義突變的骨硬化癥先證者，應用蛋白預測軟件Polyphen-2進行突變體蛋白功能預測，并探討其基因型和臨床表型的相關性；
　?、葘τ谶z傳學確診剪切位點突變的骨硬化癥先證者，進行mRNA逆轉錄后RT-PCR分析，明確該剪切位點對于蛋白功能的影響。
　　結果：
　　1

4、.本研究確診了6例ADOⅡ患者和1例IARO患者，基因檢測證實了8個CLCN7基因突變，其中2個（c.856C>T，p.R286W；c.637C>T，P.L213F）為已報道的突變；5個（c.1039G>A，p.G347R；c.976A>G，p.R326G；c.869C>A，p.S290Y；c.1691T>C，p.L564P；c.671T>G，p.L224R）為新發(fā)的錯義突變，1個（p.L224R， p.K691FS）剪切位點的新發(fā)突變

5、。該發(fā)現極大的擴大了CLCN7基因突變數據庫。同時本研究總結并比較了CLCN7相關性的ADOⅡ和IARO患者分別在臨床特征和基因分型方面的異同點，有助于提高臨床醫(yī)師對該種疾病的認識。
　　2.本研究報道了中國首例CAII相關性骨硬化癥，通過CAII基因檢測證實了CAII基因的2個新發(fā)突變（c.T381G，p.Y127X，c.350+2T>C，IVS3+2T>C），豐富了CAII基因突變數據庫。通過臨床觀察和分子生物學研究，提高了我

6、們對于這種疾病的認識。然而，對于蛋白截短長度更短的CAII基因的無義突變或剪切突變可引起的更為惡性的臨床表現，我們僅限于推測，還存在一定的局限性。因此，后續(xù)的研究應致力于收集更多的CAII相關性骨硬化癥患者的臨床資料去明確其基因型和表型的關系。
　　結論：
　　在本研究所納入臨床診斷或擬診骨硬化癥的患者中，最終確診了CLCN7相關性骨硬化癥ADOⅡ患者6例，CLCN7相關性骨硬化癥IARO患者1例以及ARO合并RTA患者2例

7、。共發(fā)現致病基因突變10個，其中CLCN7基因突變8個，包含兩個已報道的錯義突變（p.R286W, p.L213F）；7個新發(fā)突變，其中6個為新發(fā)錯義突變（p.L224R, p.S290Y, p.R326G, p.G347R, p.L564P）,一個新發(fā)剪切位點的突變（p.K691FS）。CAII基因突變2個，均為新發(fā)突變，分別為c.350+2T>C, IVS3+2T>C剪切位點突變和c.T381C p.Y127X無義突變。將所有已證實