復方芪麻膠囊對高血壓血管內(nèi)皮保護機制及應用研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一部分 臨床研究
　　目的:
　　通過臨床觀察復方芪麻膠囊對氣虛痰濁型高血壓患者中醫(yī)癥狀積分、血壓、血流介導的內(nèi)皮依賴性舒張功能(FMD)、血管緊張素Ⅱ及內(nèi)皮微顆粒(EMPs)水平的影響，探討復方芪麻膠囊的臨床降壓療效及其對高血壓患者的血管內(nèi)皮保護作用。
　　方法:
　　選取1級、2級氣虛痰濁型原發(fā)性高血壓患者80例，隨機分為對照組及治療組各40例，對照組予以硝苯地平控釋片

2、口服，治療組在對照組基礎上加用復方芪麻膠囊口服，療程均為2個月。觀察治療前后患者中醫(yī)癥狀積分、血壓、肱動脈血流介導的舒張功能(FMD)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)及血漿內(nèi)皮微顆粒水平(EMPs)的變化。
　　結果:
　　(1)共有74例患者完成研究，其中對照組36例，治療組38例，治療前兩組患者在性別、年齡、病程、血壓級別、中醫(yī)癥狀積分、FMD、AngⅡ及EMPs水平方面比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　(2

3、)兩組在改善中醫(yī)癥狀積分方面比較:治療后，兩組中醫(yī)癥狀積分均較治療前顯著下降（P＜0.05)，治療組中醫(yī)癥狀積分差值及總有效率顯著高于對照組（P＜0.05）。
　　(3)兩組的降壓療效比較:治療后，兩組SBP及DBP均較治療前顯著下降（P＜0.05);治療組患者治療前后SBP差值（即SBP下降幅度）顯著高于對照組（P＜0.05)，DBP下降幅度則無顯著差異（P＞0.05）。
　　結論:
　　(1)復方芪麻膠囊不僅能夠降

4、壓，而且可以改善氣虛痰濁型高血壓患者的臨床癥狀;
　　(2)復方芪麻膠囊具有降低內(nèi)皮損傷因子EMPs及AngⅡ的能力，以發(fā)揮保護內(nèi)皮功能的作用。
　　第二部分 實驗研究
　　實驗一:復方芪麻膠囊對高血壓大鼠血管內(nèi)皮損傷的作用機制研究
　　目的:
　　觀察復方芪麻膠囊對自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血管內(nèi)皮活性物質(NO、ET-1及AngⅡ)、氧化應激相關因子（SOD及MDA）和主動脈血管內(nèi)皮形態(tài)學的影響，探討復方芪

5、麻膠囊對高血壓血管內(nèi)皮發(fā)揮保護作用的可能機制。
　　方法:
　　隨機將50只14周齡的自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)分為SHR組(給予蒸餾水，10ml/Kg/d)、硝苯地平組（硝苯地平，2.7mg/Kg/d）、硝苯地平+芪麻組（硝苯地平，2.7mg/Kg/d+復方芪麻膠囊，0.9288g/Kg/d）、芪麻高劑量組(復方芪麻膠囊，3.7125g/Kg/d)和芪麻低劑量組（復方芪麻膠囊，0.9288g/Kg/d），每組10只，以WK

6、Y大鼠10只作為正常對照（給予蒸餾水，10ml/Kg/d），每日灌胃一次，各組大鼠在初次給藥前及給藥后每2周分別采用無創(chuàng)尾動脈測壓法進行測壓，給藥時間為8周。
　　8周后，進行腹主動脈取血，收集并檢測血清中NO、ET-1、AngⅡ、SOD和MDA的水平。取1am長的主動脈組織行HE染色并于倒置顯微鏡下觀察其組織形態(tài)，并分別采用qRT-PCR及Western Blot技術檢測主動脈組織中eNOS、NOX4及Sirt1在mRNA和蛋白

7、水平的表達情況。
　　結果:
　　(1)血壓水平比較:
　　①從第2周開始，硝苯地平組SBP和DBP水平就顯著低于SHR組（P＜0.05)，硝苯地平+芪麻組SBP也顯著低于SHR組（P＜0.05）;從第4周開始，其余各組SBP及DBP均低于SHR組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05)。
　?、趶牡?周開始，與治療前相比，硝苯地平組及硝苯地平+芪麻組，SBP及DBP出現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0

8、.01);芪麻高劑量組，從第4周開始SBP及DBP出現(xiàn)顯著下降（P＜0.01);芪麻低劑量則從第8周開始出現(xiàn)顯著下降（P＜0.01)。
　　(2)主動脈形態(tài)學比較:WKY組大鼠主動脈內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細胞完整，中膜平滑肌細胞排列整齊;SHR組主動脈內(nèi)膜連續(xù)性被破壞，內(nèi)皮細胞可見局部缺損，中膜平滑肌細胞排列不規(guī)則;硝苯地平組可見主動脈內(nèi)膜光整性欠佳，中膜平滑肌細胞排列整齊;與硝苯地平組相比，硝苯地平+芪麻組、芪麻高劑量組、芪麻低劑量組主

9、動脈壁各層細胞排列規(guī)則，內(nèi)皮細胞未見明顯局部缺損或增厚。
　　(3)主動脈eNOS mRNA水平表達的比較:與WKY組相比，SHR組、硝苯地平組eNOS mRNA表達顯著下降（P＜0.05）;與SHR組相比，硝苯地平+芪麻組、芪麻高劑量組及芪麻低劑量組eNOS mRNA表達水平顯著升高（P＜0.05）;硝苯地平組、硝苯地平+芪麻組、芪麻高劑量組及芪麻低劑量組eNOS mRNA表達水平兩兩比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

10、r>　　(4)主動脈Sirt1 mRNA水平表達的比較:與WKY組相比，SHR組、硝苯地平組Sirt1mRNA表達顯著下降（P＜0.05）;與SHR組相比，硝苯地平+芪麻組、芪麻高劑量組及芪麻低劑量組Sirt1mRNA表達水平顯著升高（P＜0.05）;硝苯地平組、硝苯地平+芪麻組、芪麻高劑量組及芪麻低劑量組Sirt1 mRNA表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　(5)主動脈eNOS蛋白水平表達的比較:與WKY組相比，S

11、HR組及硝苯地平組eNOS蛋白表達水平顯著下降（P＜0.05）;
　　(6)主動脈NOX4蛋白水平表達的比較:與WKY組相比，SHR組NOX4蛋白水平表達顯著升高（P＜0.05);
　　(7)主動脈Sirt1蛋白水平表達的比較:與WKY組相比，SHR組Sirt1蛋白水平的表達顯著下降（P＜0.01);
　　結論:
　　(1)自發(fā)性高血壓大鼠存在內(nèi)皮結構和功能的障礙;
　　(2)復方芪麻膠囊能夠增加SHR血清

12、NO并降低ET-1及AngⅡ水平調節(jié)內(nèi)皮依賴性血管舒張功能;
　　(3)復方芪麻膠囊能夠通過增加SHR血清SOD并降低MDA水平提高內(nèi)皮細胞抗氧化應激能力;
　　(4)復方芪麻膠囊具有保護SHR主動脈內(nèi)皮結構的作用;
　　(5)硝苯地平與復方芪麻膠囊兩藥聯(lián)用可發(fā)揮更好的降壓及保護血管內(nèi)皮的優(yōu)勢;
　　(6)復方芪麻膠囊可能通過上調主動脈內(nèi)皮細胞Sirt1、eNOS的表達促進NO的合成釋放，并通過抑制NOX4的表達

13、降低氧化應激反應，從而起到保護血管內(nèi)皮的作用。
　　實驗二:復方芪麻膠囊含藥血清對AngⅡ誘導損傷HUVECs的保護作用及機制研究
　　目的:
　　利用AngⅡ刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)建立內(nèi)皮細胞損傷模型，觀察復方芪麻膠囊含藥血清對細胞凋亡及NO、ROS合成的影響，探討復方芪麻膠囊對Sirt1、eNOS及NOX4的調控途徑，從細胞水平揭示其改善高血壓內(nèi)皮細胞損傷潛在的分子機制。
　　方法:
　　

14、(1)用MTT法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)被不同濃度AngⅡ(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)干預一定時間(12h、24h、48h)后的細胞活性情況，最終確定建立HUVECs損傷模型的AngⅡ濃度為10-6mol/L，作用時間為24h。
　　(2)用MTT法檢測人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)被不同濃度復方芪麻膠囊含藥血清(5％、10％、20％)干預一定

15、時間(12h、24h、48h)后的細胞活性變化，最終表明5％、10％、20％復方芪麻膠囊含藥血清均無細胞毒性。
　　結果:
　　(1)細胞活性比較:與空白組相比，模型組細胞活性顯著降低（P＜0.01）;與模型組相比，各濃度復方芪麻膠囊含藥血清組及阿托伐他汀鈣組的細胞活性顯著升高（P＜0.01）。
　　(2)細胞形態(tài)學觀察:空白組內(nèi)皮細胞呈扁平狀圓形或梭狀鋪路石狀排列，核仁明顯，輪廓清晰;模型組多數(shù)細胞皺縮呈圓形或橢圓形

16、，細胞間間隙變大，核仁顯示不清;復方芪麻膠囊含藥血清組中部分細胞皺縮呈圓形或橢圓形，細胞間聯(lián)系較緊密，核仁較清晰，其中10％復方芪麻膠囊含藥血清細胞形態(tài)較低濃度含藥血清的細胞形態(tài)改善;經(jīng)阿托伐他汀鈣處理的細胞形態(tài)與正常組相似。
　　結論:
　　(1)10-6mol/L濃度的AngⅡ干預24h可用于制作HUVECs的損傷模型。
　　(2)復方芪麻膠囊含藥血清可以改善受損的HUVECs的細胞形態(tài)，其中以10％濃度效果最佳。

17、
　　(3)復方芪麻膠囊含藥血清能夠明顯提高HUVECs培養(yǎng)基中NO的水平，并抑制ROS的產(chǎn)生以減輕氧化應激對細胞造成的損傷，其中以10％濃度效果最佳。
　　(4)復方芪麻膠囊含藥血清能夠明顯抑制HUVECs的凋亡，其中以10％濃度干預后的細胞凋亡率最低。
　　(5)AngⅡ能夠抑制HUVECs中eNOS及Sirt1的表達并促進NOX4的表達，從而對內(nèi)皮細胞造成損傷;
　　(6)復方芪麻膠囊及阿托伐他汀鈣能夠通過