多枝霧水葛抗炎藥效物質(zhì)及作用機(jī)制研究.pdf

1、多枝霧水葛Pouzolziazeylanica(L.) Benn.Var.microphylla(Wedd.)W.T.Wang.（PZB）又名石珠，石珠仔。初始載于《生草藥性備要》，其主要功效有解毒消腫，接骨，可用于癰腫，梅毒，肺結(jié)核。被民間廣泛使用。前期對PZB藥理作用的研究表明其對皮膚膿腫潰瘍和炎癥疼痛均具較好作用，并對其活性部位進(jìn)行了初步篩選?；瘜W(xué)成分研究表明該植物含有黃酮苷類、三萜類和木脂素類等，有必要進(jìn)一步研究PZB抗炎鎮(zhèn)痛有

2、效部位和有效成分，探討它們的抗炎作用機(jī)制。本文考察了PZB不同極性部位體內(nèi)抗炎鎮(zhèn)痛作用、體外抗炎活性和體外抗菌活性，并對抗炎機(jī)制進(jìn)行了初步探討；在化學(xué)成分研究基礎(chǔ)上，對幾個特征化合物進(jìn)行了體外抗炎作用及機(jī)制研究；考察了PZB藥效部位大孔吸附樹脂純化工藝。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　1.選用大孔吸附樹脂將多枝霧水葛水總提物（AE）分為不同極性部位：水部位（WP）、30％乙醇部位（30%EP）、60%乙醇部位（60%EP）和85%乙

3、醇部位（85%EP）。根據(jù)專利報道方法，得到總黃酮類物質(zhì)。
　?。?）比較各極性部位的抗炎鎮(zhèn)痛作用，篩選有效部位。建立醋酸致小鼠扭體和二甲苯致小鼠耳腫脹模型，測定小鼠扭體次數(shù)和耳腫脹度。結(jié)果顯示AE、WP和30%EP組小鼠扭體次數(shù)和小鼠耳腫脹度與空白對照組相比均有顯著性差異，60%EP和85%EP對小鼠扭體和小鼠耳腫脹無明顯抑制作用。說明AE、WP和30%EP均有抗炎鎮(zhèn)痛作用，60%EP和85%EP無明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用。
　　

4、（2）研究AE、WP、30%EP及總黃酮體外抗炎作用和機(jī)制。建立脂多糖（LPS）誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外炎癥細(xì)胞模型，用Griess法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量，用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測TNF-α與PGE2含量。結(jié)果表明，80μg/ml AE組，40和80μg/ml WP組，30%EP各濃度組和總黃酮中、高濃度組均明顯減少NO；AE高濃度組，30%EP各濃度組和10和20μg/ml總黃酮組均明顯減少PGE2和TNF-α含量，WP

5、各濃度組能減少PGE2含量，40和80μg/ml WP組能減少TNF-α含量。說明AE、WP、30%EP及總黃酮均具有一定抗炎作用,抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子的釋放是其抗炎機(jī)制之一。推測黃酮類可能為該植物有效成分之一。
　?。?）采用打孔法，通過測定抑菌圈的大小考察AE、WP、30%EP、60%EP和85%EP對金黃色葡萄球菌的抑制作用。結(jié)果顯示，AE組抑菌圈為9mm，其他組均無明顯抑菌圈。說明AE對金黃色葡萄球菌有一定抑制作用，其他部

6、位均無明顯抑菌作用。
　　2.從課題組分離的化合物中選擇部分代表性化合物，研究化合物的體外抗炎作用和機(jī)制：1（Pouzolignan D）、2（Pouzolignan C）、3（Pouzolignan E）、4（Pouzolignan F）、5（Pouzolignan G）、6（木栓酮）、7（牡荊苷）、8（槲皮素-3,7-O-2-α-L-吡喃鼠李糖苷）、9(槲皮素3-O-[α-L-鼠李糖(1→6)-β-D-葡萄糖]-7-O-α-L

7、-鼠李糖苷)。化合物1-5為木脂素類，6為木栓烷類三萜，7-9為黃酮苷類。
　　建立LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外炎癥細(xì)胞模型，用Griess法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中NO含量，用酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測TNF-α與PGE2含量；用實時定量RT-PCR法檢測iNOS、COX-2和TNF-αmRNA表達(dá)量。結(jié)果表明，化合物1-7均抑制炎癥細(xì)胞釋放NO，化合物8和9無明顯抑制作用；化合物1-3能減少PGE2和TNF-α的釋放，化合物7

8、高濃度組降低PGE2含量；化合物1對COX-2和TNF-α的mRNA表達(dá)均有抑制作用，化合物2中iNOS、COX-2和TNF-α的mRNA表達(dá)量均顯著低于模型組，化合物3對iNOS的mRNA表達(dá)有明顯抑制作用。說明，化合物1-7均有一定體外抗炎作用，化合物8和9無明顯抗炎作用。化合物1通過抑制COX-2和TNF-αmRNA的表達(dá)抑制PGE2和TNF-α釋放，且抑制NO釋放而發(fā)揮抗炎作用；化合物2通過抑制iNOS、COX-2和TNF-αm

9、RNA表達(dá)抑制NO、PGE2和TNF-α釋放而發(fā)揮抗炎作用；化合物3通過抑制iNOS mRNA表達(dá)而抑制NO釋放，且抑制PGE2和TNF-α釋放而起到抗炎作用。化合物7通過抑制PGE2和NO釋放起到抗炎作用。
　　3.考察PZB藥效部位大孔吸附樹脂的純化工藝。采用紫外分光光度法建立了總黃酮、總?cè)萍翱偡铀岷繙y定方法，以這三種成分含量為指標(biāo)，從9種不同極性樹脂中篩選得到吸附與解吸附性能最佳樹脂的樹脂HP20，進(jìn)一步考察不同條件對成