蛋白藥物內(nèi)耳緩釋給藥系統(tǒng)的構(gòu)建與評(píng)價(jià).pdf

1、內(nèi)耳疾病如特發(fā)性突聾、梅尼埃病、蝸性耳鳴、醫(yī)源性感音神經(jīng)性聾等，嚴(yán)重影響患者的生活。但由于血-迷路屏障（BLB）的存在，使得全身給藥效果不理想。采用臨床常用的內(nèi)耳給藥方法—鼓室給藥（IT），藥物可經(jīng)圓窗膜（RWM）進(jìn)入內(nèi)耳，因而可用于內(nèi)耳疾病的治療。臨床采用干擾素α（IFNα）可治療突發(fā)性耳聾。因此，本研究選用IFNα-2b作為蛋白類(lèi)模型藥物，針對(duì)其體內(nèi)半衰期短、穩(wěn)定性較差等特點(diǎn)，將其制成經(jīng)內(nèi)耳給藥的納米制劑和溫敏凝膠制劑及復(fù)合釋藥系統(tǒng)

2、，并開(kāi)展體內(nèi)外評(píng)價(jià)，期望能為治療內(nèi)耳疾病的蛋白藥物緩釋制劑的研發(fā)提供參考與借鑒。
　　采用復(fù)乳-溶劑揮發(fā)法制備IFNα-2b聚乳酸羥基乙酸（PLGA）納米粒（NPs），并對(duì)其制備工藝進(jìn)行單因素考察，得到了對(duì)包封率影響較大的三個(gè)因素：載體材料PLGA用量、乳化劑 PVA濃度、外水相體積。以這三個(gè)影響因素為變量，以包封率、粒徑為指標(biāo)，采用Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，用響應(yīng)面法進(jìn)行處方優(yōu)化。最終得到IFNα-2b PLGA NPs最

3、優(yōu)處方為PLGA用量為114 mg，乳化劑PVA濃度為1％，外水相用量選擇9 mL，制備得到NPs包封率為38.1%，粒徑為298 nm，穩(wěn)定性良好；體外釋放結(jié)果顯示，相比較溶液劑，PLGA納米粒有一定的緩釋效果，在體外可持續(xù)釋放36 h。
　　選取泊洛沙姆407（P407）和泊洛沙姆188（P188）為基質(zhì)，用冷溶法制備凝膠溶液，試管倒置法確定膠凝溫度，研究了P407和P188的濃度與相變溫度的關(guān)系，采取相變溫度合適的三個(gè)處方進(jìn)

4、行體外溶蝕試驗(yàn)，選出最優(yōu)處方P407：20%、P188：5%，膠凝溫度為32.3℃，并對(duì)其進(jìn)行流變學(xué)考察，結(jié)果測(cè)得膠凝溫度與試管倒置法基本一致。泊洛沙姆凝膠分別裝載BSA及其N(xiāo)Ps，體外釋放考察顯示兩者均具有緩釋作用，泊洛沙姆凝膠能在體外釋放17 h，而載NPs泊洛沙姆凝膠（NPs/P）能持續(xù)釋藥48 h。
　　以殼聚糖（CS）和β-甘油磷酸鈉（β-GP）為原料，通過(guò)調(diào)節(jié)體系的pH值，制備CS/β-GP溫敏凝膠，采用倒置法和濁度法

5、確定體系的膠凝時(shí)間。分別考察了CS的規(guī)格、CS的濃度、β-GP的用量對(duì)膠凝時(shí)間的影響，最終選用脫乙酰度為96.2%的CS、配制濃度為2%（W/V），取2mLCS溶液，加入400μL56%β-GP，在體溫環(huán)境放置3 min即形成凝膠。所制備的凝膠溶脹性和保水性能良好，可滿(mǎn)足體內(nèi)給藥后持續(xù)釋藥的要求；體外降解實(shí)驗(yàn)顯示，CS/β-GP凝膠在含酶的PBS溶液中，能緩慢降解，一個(gè)月降解50%左右。紅外測(cè)試結(jié)果表明，CS/β-GP凝膠的形成并不僅是

6、簡(jiǎn)單的物理混合，還存在氫鍵力的作用；凝膠掃描電鏡圖顯示，NPs粘在凝膠骨架上，可通過(guò)凝膠內(nèi)部孔道持續(xù)釋放藥物。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明，CS凝膠能緩慢釋藥36h，而載NPs CS凝膠（NPs/CS）在體外緩釋作用明顯，達(dá)到72 h。
　　體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)結(jié)果表明，IFN各劑型經(jīng)單側(cè)鼓室給藥后都能進(jìn)入內(nèi)耳外淋巴（PL）。相比于溶液劑，NPs能在一定程度上增大IFN進(jìn)入內(nèi)耳的量和體內(nèi)滯留時(shí)間，其在PL的相對(duì)生物利用度是溶液劑的122.4%，MRT由

7、9.1 h延長(zhǎng)至10.4 h。將IFN制備成溫敏凝膠能明顯增加藥物在內(nèi)耳的分布，IFN/P、IFN/CS溫敏凝膠經(jīng)鼓室注射后在豚鼠PL的生物利用度分別是溶液劑的216.9%、277.0%，其在PL平均滯留時(shí)間也分別從9.1 h延長(zhǎng)至10.9 h、14.7 h。和IFN凝膠劑相比，NPs凝膠復(fù)合制劑能進(jìn)一步增強(qiáng)藥物在內(nèi)耳的滯留時(shí)間；和IFN/P凝膠相比，NPs/P凝膠在PL的 MRT由10.9 h提升至12.9 h；和IFN/CS凝膠相比

8、，NPs/CS凝膠在PL的 MRT由14.7 h升高到23.2 h。兩種凝膠制劑均能作為IFN溶液或NPs的載體，但相比于泊洛沙姆，藥物載入殼聚糖凝膠經(jīng)鼓室注射后在體內(nèi)滯留時(shí)間更長(zhǎng)。
　　綜上所述，本研究結(jié)果表明，將蛋白藥物IFN制備成納米和凝膠制劑及其復(fù)合釋藥系統(tǒng)，不僅能延長(zhǎng)藥物的釋放時(shí)間，還能將藥物有效輸送至內(nèi)耳 PL，顯著提高藥物在內(nèi)耳的局部生物利用度。相比于泊洛沙姆凝膠，CS/β-GP凝膠在體內(nèi)外的緩釋效果更佳；將IFN制