吸煙對(duì)哮喘的影響及SIRT1調(diào)控香煙煙霧誘導(dǎo)氣道炎癥的機(jī)制研究.pdf

1、[目的]：
　　本研究通過比較吸煙哮喘與非吸煙哮喘患者在臨床控制、氣道炎癥等方面的影響探討吸煙對(duì)哮喘的影響;并通過分離人外周血淋巴細(xì)胞和檢測SIRT1表達(dá)水平進(jìn)一步探討吸煙影響支氣管哮喘氣道炎癥的可能發(fā)病機(jī)制;還通過體外入支氣管上皮細(xì)胞培養(yǎng)，研究SIRT1對(duì)香煙提取物(CSE)誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞炎癥的調(diào)控作用，為吸煙哮喘的發(fā)病機(jī)制供新的理論論據(jù)，為臨床提供更有效的治療手段。
　　[方法]：
　　1.利用調(diào)查問卷的形

2、式，收集并篩選2014年1月至2014年9月在廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院就診經(jīng)正規(guī)治療的慢性支氣管哮喘患者共268例，根據(jù)是否吸煙，分為吸煙組和非吸煙組。入組患者均符合2008年中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)和全球哮喘防治創(chuàng)議(GINA2010版)哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)吸煙患者與非吸煙患者的發(fā)病年齡、病程、年齡、性別、過敏史和家族史等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分別記錄吸煙患者和非吸煙患者的FEV1、ACT評(píng)分、EOS、血清IgE水平，比較兩組患者各項(xiàng)指標(biāo)的差異，評(píng)

3、價(jià)吸煙對(duì)哮喘的影響。
　　2.招募24位志愿者，分為正常組（7例）、正常吸煙組（5例）、哮喘組（8例）、吸煙哮喘組（4例），抽取24位志愿者靜脈血并檢測肺功能(FEV1)。經(jīng)B(o)yum.設(shè)計(jì)法分離得外周血淋巴細(xì)胞，Q-PCR檢測各組淋巴細(xì)胞SIRT1的表達(dá)水平。比較各組的肺功能和SIRT1表達(dá)水平。
　　3.培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞，用CSE建立吸煙誘導(dǎo)炎癥的細(xì)胞模型，Q-PCR、Western Blot等方法檢測SIRT1

4、、IL-8的表達(dá)。過表達(dá)或shRNA干擾SIRT1的腺病毒感染細(xì)胞后，再以CSE誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥反應(yīng)，Q-PCR、Western Blot等方法檢測Sirt1、IL-8的表達(dá)，比較干預(yù)前后上述指標(biāo)的差異。
　　[結(jié)果]：
　　1.哮喘吸煙患者FEV1％（68.85±19.66），較非吸煙哮喘患者(76.01±15.81)低，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。哮喘吸煙患者ACT評(píng)分（18.92±4.67）分較非吸哮喘煙患

5、者（22.89±3.83）分低;哮喘吸煙患者1年內(nèi)急性發(fā)作次數(shù)（2.63±2.28）次較非吸煙哮喘患者（1.89±2.84）次多;哮喘吸煙患者平均吸入性糖皮質(zhì)激素(ICS)的使用量（434.55±102.45）ug/d較非吸煙哮喘患者（372.37±161.05）ug/d高，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。EOS和IgE的檢測結(jié)果顯示:吸煙組患者血中嗜酸細(xì)胞百分比均值（3.20±0.24）％較非吸煙組（3.22±0.26）％低

6、，但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。吸煙組血IgE為（316.22±507.16）IUI/ml較非吸煙組為（411.10±787.73）IU/ml低，亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。
　　2.24名志愿者的外周血淋巴細(xì)胞SIRT1水平，哮喘組、吸煙哮喘組較正常人組均顯示有不同程度的升高(p＜0.05)，以哮喘組升高最明SIRT1明顯增高。吸煙組較正常組SIRT1增加，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。哮喘吸煙組較哮喘組，SIRT1下降(p＞

7、0.05)和肺功能較降低(p＜0.05)。
　　3.狀態(tài)良好的人支氣管上皮細(xì)胞(HBE)分別用3％、6％的CSE處理6和24小時(shí)，Q-PCR檢測炎癥因子IL-8、SIRT1的表達(dá)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，IL-8的表達(dá)均明顯升高，SIRT1表達(dá)略降低，且無明顯時(shí)間劑量依賴關(guān)系。用腺病毒預(yù)處理HBE72小時(shí)后再加3％的CSE作用6小時(shí)，結(jié)果顯示adSIRT1上調(diào)SIRT1的表達(dá)(p＜0.001)，adiSIRT1下調(diào)SIRT1的表達(dá)

8、(p＜0.05);adSIRT1+3％CSE組較adGFP+3％CSE組的SIRT1升高(p＜0.05)，且IL-8下降(p＜0.05）。adiSIRT1+3％CSE組較adU6+3％CSE組的SIRT1降低(p＜0.05)，而IL-8升高(p＜0.01)。
　　[結(jié)論]：
　　1.吸煙組患者平均開始吸煙年齡早于非吸煙哮喘患者的發(fā)病年齡，平均1年內(nèi)哮喘急性發(fā)作次數(shù)高于非吸煙哮喘患者，吸煙哮喘患者肺功能較非吸煙哮喘患者更差，糖