2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、基于小分子配體的保守性,我們實驗室提出了原始蛋白結構起源的小分子誘導模型,認為最早產生的蛋白質是由ATP誘導選擇產生的。采用cDNA展示技術,對該假說進行了初步驗證,獲得的豐度最高的蛋白質具有ATP結合能力及ATP水解活性。本課題在該研究基礎上,對篩選得到的豐度最高蛋白質進行了初步的功能研究,主要內容包括對體外進化ATP結合蛋白的生化性質測定及互作蛋白的篩選研究。
  首先,設計新引物,以NcoⅠ和EcoRⅠ作為酶切位點,構建原核

2、表達載體pET-28b-abp1,自誘導表達獲得高濃度全長蛋白。BAC試劑盒進行定量檢測蛋白濃度為2.11 mg/mL。核磁共振法解析蛋白質二級結構,發(fā)現(xiàn)蛋白質主要以α-Helix和無規(guī)卷曲的二級結構形式存在。測定蛋白質與ATP結合常數(shù)Kd值為0.303±0.073μM。
  其次,鉬酸鹽-孔雀石綠分光光度法對蛋白進行了酶活性質的測定,發(fā)現(xiàn)該蛋白同時具有ATPase、UTPase、GTPase、CTPase四種酶活性,其中ATPa

3、se活性最強。使用HPLC法研究蛋白質水解ATP生成的產物,發(fā)現(xiàn)蛋白質水解ATP生成的主要產物是ADP。在20-100mM濃度范圍內隨著蛋白酶濃度增加,酶活增大。在最適酶活條件的測定中發(fā)現(xiàn),酶促反應的最適溫度為45℃,該溫度高于普通酶的最適溫度,由于原始環(huán)境溫度偏高,也恰好能夠說明我們的蛋白具有早起源蛋白的特性;酶促反應最適pH值為8.0;40 mM蛋白酶的體系中最適底物濃度為12.5μM;并發(fā)現(xiàn)隨著鹽離子濃度增加,蛋白質酶活降低。

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