交感神經(jīng)-GRK2-PKA通路對急性冠脈綜合征Th細(xì)胞和心功能的調(diào)節(jié)及意義.pdf

1、本研究的主要內(nèi)容包括兩個部分:
　　第一部分 ACS患者Th淋巴細(xì)胞亞型的表達(dá)及交感神經(jīng)系統(tǒng)對其表達(dá)的影響
　　研究目的：
　　急性冠脈綜合征(ACS)涉及自主神經(jīng)功能失調(diào)和T輔助淋巴細(xì)胞因子的變化。然而，交感神經(jīng)過度激活對免疫Th細(xì)胞的作用尚不清楚。本研究旨在對急性冠脈綜合征(ACS)患者自主神經(jīng)功能變化及外周血T輔助淋巴細(xì)胞亞型表達(dá)的相關(guān)性研究，探討輔助淋巴細(xì)胞亞型表達(dá)的調(diào)節(jié)及臨床意義。
　　研究方法：

2、>　　隨機(jī)選擇103冠心病患者，根據(jù)入選標(biāo)準(zhǔn)最后選定65例冠心病患者，其中SAP患者22例，UAP患者22例，AMI患者21例，另隨機(jī)選擇非冠心病患者(NCA)23例作為對照組。
　　流式細(xì)胞儀測定淋巴細(xì)胞Th1和Treg細(xì)胞因子水平;放免法檢測外周血淋巴細(xì)胞GRK2;酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測血漿IL-6，IL-17，IL-4，and TGF-β和淋巴細(xì)胞PKA水平;高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行外周血EPI和NE測定;T-b

3、et and STAT-5蛋白表達(dá)水平采用western blot方法測定;動態(tài)心電圖分析心率變異性(HRV)高頻(HF)，低頻(LF)，總體標(biāo)準(zhǔn)差(SDNN)，心動周期標(biāo)準(zhǔn)差的平均值(SDNN-Index);心臟彩超測定左室心功能(LVEF)。
　　數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，兩兩比較用t檢驗(yàn)，組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析用多元線性回歸分析檢驗(yàn)，用GraphPad Prism X6統(tǒng)計軟件進(jìn)行分

4、析處理，主要統(tǒng)計指標(biāo)均進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　研究結(jié)果：
　　1.血漿NE、EPI濃度，外周血T淋巴細(xì)胞GRK2、PKA活性和Treg、 Th1細(xì)胞因子的變化
　　隨著CAD嚴(yán)重程度增加，血漿NE、EPI濃度及外周血T淋巴細(xì)胞GRK2、PKA活性逐漸升高（均p＜0.01），而在SAP和NCA患者中，上述指標(biāo)無明顯差別(p＞0.05);分別以CD4+T內(nèi)IFN-γ和Foxp3+代表Th1和T

5、reg型細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在UAP和AMI中，F(xiàn)oxp3+/CD4+明顯低于NCA和SAP，(p＜0.001)，但在UAP和AMI兩組或NCA和SAP兩組中Foxp3+/CD4+無明顯差別，(p=0.6905;p=0.1552);與NCA和SAP相比，IFN-γ+/CD4+在UAP中明顯升高(p＜0.01)而在AMI中表現(xiàn)最高(p=0.0078)。
　　2.CAD患者PBMCs中T-bet和STAT-5蛋白表達(dá)
　　AMI患者中T-

6、bet蛋白表達(dá)明顯高于其他三組(p＜0.01)，而UAP組高于NCA和SAP組，但在NCA和SAP兩組中無差異。相反地，STAT-5蛋白表達(dá)顯著低于其他三組(p＜0.01)，而UAP組顯著低于NCA和SAP組，但在NCA和SAP兩組中無差異(p＜0.01)。
　　3.Th亞型與兒茶酚胺類激素水平在CAD患者中的相關(guān)性分析
　　多元線性回歸分析顯示了Th亞型與兒茶酚胺類激素水平在CAD患者中的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)在CAD患者中Foxp

7、3-Treg頻數(shù)與NE和EPI濃度均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.5799，p＜0.001;r=-0.5099，p＜0.001)(圖3a，3b); IFN-γ-Th1頻數(shù)與NE和EPI濃度均呈正相關(guān)(r=0.5559, p＜0.001;r=0.5422, p＜0.001)。
　　4.Th亞型與EPI水平在NCA+SAP組和UAP+AMI組患者中的相關(guān)性分析
　　多元線性回歸分析在NCA+SAP組和UAP+AMI組患者中Th亞型與EPI

8、的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)在NCA+SAP組和UAP+AMI組中，F(xiàn)oxp3-Treg頻數(shù)與EPI濃度均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.3522，p=0.0177;r=-0.3770，p=0.0127);而IFN-γ-Th1頻數(shù)與EPI濃度均呈正相關(guān)(r=0.3580, p=0.0158;r=0.3654, p=0.0160)。
　　5.Th亞型與NE水平在NCA+SAP組和UAP+AMI組患者中的相關(guān)性分析
　　多元線性回歸分析在NCA+SAP組

9、和UAP+AMI組患者中Th亞型與NE的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)在NCA+SAP組和UAP+AMI組中，F(xiàn)oxp3-Treg頻數(shù)與NE濃度均呈負(fù)相關(guān)(r-0.3659，p=0.0135;r-0.3707，p=0.0144);而IFN-γ-Th1頻數(shù)與NE濃度均呈正相關(guān)(r=0.3620, p=0.0145;r=0.4417, p=0.0030)。
　　6.GRK2-PKA與Th亞型在CAD患者中的相關(guān)性分析
　　多元線性回歸分析CAD患

10、者GRK2表達(dá)與EPI和NE的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)在CAD患者中，GRK2表達(dá)與EPI和NE均呈顯著正相關(guān)(r=0.4227，p＜0.001;r=0.4971，p＜0.001);Foxp3-Treg頻數(shù)與PKA活性呈負(fù)相關(guān)(r=-0.4812，p＜0.001);而IFN-γ-Th1頻數(shù)與PKA活性呈正相關(guān)(r=0.6095，p＜0.001); PKA活性與GRK2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.5318，p＜0.001)。
　　7.HRV與Th亞型

11、、GRK2和PKA相關(guān)性分析
　　CAD患者GRK2活性與交感神經(jīng)激素釋放增加有關(guān)，而Th細(xì)胞分化又與GRK2活性增加有關(guān)，因此推測Th細(xì)胞分化過程與交感神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)有關(guān)。
　　9.血清其他細(xì)胞因子的變化
　　IL-6在NCA and SAP中，IL-17在NCA和SAP中,以及IL-4在四組中均無顯著差異(p=0.7105; p=0.7988; F3,52=0.3040, p=0.8224)。
　　研究結(jié)論：<

12、br>　　交感神經(jīng)過度活躍和CD4+T分化異常都可能導(dǎo)致ACS患者的斑塊不穩(wěn)定和急性心臟事件。交感神經(jīng)系統(tǒng)至少部分的通過GRK2-PKA通路調(diào)節(jié)這種免疫系統(tǒng)的改變，從而影響心血管疾病的發(fā)病機(jī)制及其臨床結(jié)果。為冠心病的診治提供新的理論依據(jù)。
　　第二部分 基于交感神經(jīng)-GRK2通路調(diào)節(jié)AMI伴抑郁患者心功能的干預(yù)研究
　　研究目的：
　　GRK2被公認(rèn)為是治療心肌梗死的潛在治療靶點(diǎn)。帕羅西汀，一個選擇性5-羥色胺受體再攝

13、取抑制劑，常被用于缺血性心臟病伴抑郁的治療。近來研究發(fā)現(xiàn)，帕羅西汀可以作為一個GRK2的直接抑制劑，能夠逆轉(zhuǎn)心肌梗死后實(shí)驗(yàn)動物的心肌重塑，改善心功能，而它對于心臟功能改善中的臨床效果仍未確定。我們通過帕羅西汀與另一個選擇性5-羥色胺受體再攝取抑制劑但是非直接GRK2抑制劑的氟西汀相比較，觀察帕羅西汀對心梗合并抑郁患者心功能及抑郁狀態(tài)的作用。
　　研究方法：
　　隨機(jī)選擇急性心肌梗死(AMI)患者308例，依據(jù)AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn)

14、選擇患者:缺血性胸痛超過30分鐘但不超過24小時;18導(dǎo)同步心電圖相鄰兩個導(dǎo)聯(lián)持續(xù)性ST段抬高＞0.1 mV,或ST段壓低，T波倒置;心肌壞死標(biāo)志物cTnI升高大于10倍以上。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的操作流程，所有患者均進(jìn)行冠脈造影檢查。入院24-48小時內(nèi)，根據(jù)HAMD-17評分和SDS評分，其中67(23％)名心?；颊甙殡S著抑郁狀態(tài)，最終，308名患者中有292人完成了為期8周的實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)是一個隨機(jī)、雙盲前瞻性研究。
　　研究結(jié)果：

15、>　　一、AMI和AMID中GRK2的蛋白表達(dá)
　　外周血淋巴細(xì)胞GRK2蛋白表達(dá)（2.054±0.5661）在AMID患者中明顯比AMI（1.758±0.6021，p=0.0065）患者升高。在急性心梗伴抑郁和急性心梗不伴抑郁兩組治療后，GRK2蛋白水平均較治療前降低;而急性心梗伴抑郁患者抗抑郁治療后較急性心梗不伴抑郁治療后，GRK2蛋白水平降低更顯(P＜0.01)
　　二、AMID患者自主神經(jīng)功能與抑郁狀態(tài)和GRK2表達(dá)

16、相關(guān)性
　　在AMI患者HAMD-17評分與HRV指數(shù)呈負(fù)相關(guān);SDS評分與SDNN、HF、LF/HF呈負(fù)相關(guān);淋巴細(xì)胞GRK2與SDNN、LF/HF呈負(fù)相關(guān)。
　　三、心梗標(biāo)準(zhǔn)治療聯(lián)合抗抑郁治療效果
　　1.帕羅西汀和氟西汀對AMID患者GRK2的影響
　　治療前AMID患者GRK2蛋白水平在帕羅西汀組、氟西汀組和不加抗抑郁組三組間無差別，(P＞0.05);治療8周后，三組患者GRK2水平較各自的治療前均有所降

17、低，(P＜0.01).
　　2.抗抑郁治療對AMID患者抑郁評分/HRV指數(shù)/兒茶酚胺激素/心功能的影響
　　AMID患者帕羅西汀組和氟西汀組HAMD-17和SDS評分較不加抗抑郁治療組明顯改善(P＜0.01)，而在帕羅西汀組和氟西汀組兩組間比較，HAMD-17和SDS評分無明顯差別(P＞0.05);三組患者HRV指數(shù)在8周治療后均較治療前提高了;而三組患者EPI和NE在8周治療后均較治療前降低了.
　　3.抗抑郁治療