巴戟天炮制過程中化學(xué)成分變化規(guī)律的研究.pdf

1、巴戟天，為茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的干燥根，是廣東省道地藥材，也是我國著名的“四大南藥”之一，具有補(bǔ)腎陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕的功效，用于陽痿遺精，宮冷不孕，月經(jīng)不調(diào)，少腹冷痛，風(fēng)濕痹痛，筋骨痿軟。巴戟天中所含的化學(xué)成分主要為蒽醌、寡糖、環(huán)烯醚萜等，具有抗抑郁、抗骨質(zhì)疏松、抗氧化、抗炎、促進(jìn)生精、促進(jìn)血管生成、神經(jīng)保護(hù)等多方面的藥理作用。《中國藥典》(2010年版)中巴戟天飲片有4種，包括巴戟天、巴戟肉、

2、鹽巴戟天和制巴戟天。不同來源的巴戟天生藥材外觀形態(tài)及有效成分含量有較大差異，而且炮制會使巴戟天的化學(xué)成分發(fā)生變化，進(jìn)而可能引起藥材質(zhì)量及療效的改變，因此，巴戟天飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂要充分考察不同產(chǎn)地、生長年限等因素的影響，以及生品與各炮制品的差異。
　　巴戟天炮制后化學(xué)成分和藥理作用均發(fā)生了變化，目前對炮制品與生品之間，即炮制前后主要化學(xué)成分的指紋圖譜或含量變化研究較多，但發(fā)生在炮制過程中的化學(xué)成分的變化過程及規(guī)律卻缺乏系統(tǒng)地研究。

3、因此，本研究通過比較廣東省不同產(chǎn)地、不同生長年限、不同品種的巴戟天蒽醌類成分高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜的差異評價(jià)生巴戟天的質(zhì)量，得出德慶縣、3～4年生、小葉種巴戟天質(zhì)量較優(yōu)，以該條件下生巴戟天為原料，研究巴戟肉、鹽巴戟天、制巴戟天在炮制過程中化學(xué)成分的變化規(guī)律，為巴戟天飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供依據(jù)。
　　主要研究內(nèi)容如下:
　　(1)巴戟天蒽醌類成分的高效液相色譜指紋圖譜研究
　　利用HPLC指紋圖譜方法考察，確定

4、巴戟天的色譜條件為:DiamonsilTM C18(4.6mm×250 mm，5μm)色譜柱;流動相:乙腈(A)-0.4％磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～5 min,20％A;5～10 min,20％～44％A;10～40 min,44％A;40～50 min,44％～95％A;50～55 min，95％A);流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20μL;檢測波長:277 nm;柱溫:30℃。
　　巴戟天蒽醌類成分HPLC指紋圖譜

5、色譜峰豐富、分離度好、分析時(shí)間短，共有模式中得到20個共有峰，其中13號峰為甲基異茜草素-1-甲醚。分別比較了32個來自廣東省不同產(chǎn)地、不同生長年限、不同品種的巴戟天指紋圖譜，通過相似度評價(jià)和聚類分析等方法評價(jià)不同來源藥材的質(zhì)量，結(jié)果表明，德慶縣高良鎮(zhèn)所產(chǎn)巴戟天質(zhì)量優(yōu)良，采收年限以3～4年為佳;小葉種巴戟天蒽醌類成分含量較高，且產(chǎn)量高，為巴戟天優(yōu)良品種;通過研究加工過程對巴戟天質(zhì)量的影響，發(fā)現(xiàn)巴戟天抽去木心后易發(fā)霉，霉變后化學(xué)成分發(fā)生較

6、大的變化，建議產(chǎn)地加工不抽木心曬干。
　　(2)巴戟天炮制過程中蒽醌類成分的變化規(guī)律
　　利用HPLC指紋圖譜技術(shù)，以甲基異茜草素-1-甲醚及總蒽醌類化學(xué)成分為評價(jià)指標(biāo)，考察巴戟肉、鹽巴戟天、制巴戟天3種炮制品分別在不同蒸制時(shí)間、加鹽量及鹽蒸時(shí)間、甘草量及煎煮時(shí)間條件下蒽醌類化學(xué)成分的變化規(guī)律。結(jié)果表明，巴戟天炮制品中蒽醌類化學(xué)成分隨加熱時(shí)間和輔料的變化而變化，甲基異茜草素-1-甲醚在加熱和加入輔料鹽后均有增溶現(xiàn)象，但隨著時(shí)

7、間的延長，其含量逐漸下降;在加入輔料甘草后該成分明顯下降;總蒽醌類化學(xué)成分在不同炮制過程中隨著加熱時(shí)間的增加和輔料鹽、甘草的加入，其變化均為先上升后下降。研究結(jié)果可為巴戟天的炮制方法的修訂提供科學(xué)依據(jù)。
　　(3)巴戟天炮制過程中寡糖類成分的變化規(guī)律
　　巴戟天寡糖類成分的高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器(HPLC-ELSD)色譜條件為:Waters XBridgeTM Amide（4.6 mm×250 mm，3.5μm）色譜

8、柱，流動相:0.2％三乙胺乙腈(A)-0.2％三乙胺水溶液(B)，梯度洗脫(0～10 min，75～70％A;10～20 min，70％A;20～45 min，70～60％A;45～70 min，60％A);流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:20μL;ELSD漂移管溫度:75℃;氮?dú)饬髁?2.0 L/min;柱溫:35℃。
　　采用HPLC-ELSD技術(shù)，以巴戟天中1～5糖鏈的寡糖（D-果糖、D-無水葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖、耐斯

9、糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖）的含量及6～10糖鏈寡糖的峰面積為指標(biāo)，考察巴戟肉、鹽巴戟天在炮制過程中寡糖類成分的變化規(guī)律。結(jié)果表明，巴戟肉隨悶潤加水量和蒸制溫度、鹽巴戟天隨輔料鹽濃度的增加，其寡糖類成分均呈先上升后下降的趨勢，巴戟肉和鹽巴戟天中1～3糖鏈含量隨蒸制時(shí)間的延長不斷增加，而4糖鏈以上含量則不斷下降，并產(chǎn)生了一系列隨蒸制時(shí)間的延長峰面積不斷增加的新成分。據(jù)此得出，巴戟肉的最佳悶潤加水量為70 mL/100 g，蒸制溫度為160