參附益心顆粒改善肺動脈高壓的機制研究.pdf

1、我國不同地區(qū)之間經(jīng)濟發(fā)展不平衡，目前仍處于發(fā)展中行列。目前肺動脈高壓(Pulmonary Arterial Hypertension，PAH)靶向治療藥物未能列入國家基本醫(yī)療保險藥品目錄，患者經(jīng)濟負擔(dān)沉重。我國PAH患者接受靶向藥物治療的比例較低，約為20％，即使在部分經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)，PAH靶向藥物的覆蓋率僅能達到75％。
　　PAH是一種高致死性心肺血管疾病，主要特征是肺血管重構(gòu)引起阻力進行性升高，最終導(dǎo)致患者右心衰竭而死亡，臨床

2、上主要表現(xiàn)為呼吸困難、乏力、頭暈、胸痛、咯血等，與祖國醫(yī)學(xué)“肺脹”、“心衰病”類似。PAH的藥物治療主要是對右心功能不全和肺動脈原位血栓形成的治療，即吸氧、利尿、強心和抗凝治療，以及肺血管擴張劑的靶向藥物治療。通過治療，可明顯得改善患者的癥狀，提高生活質(zhì)量，而且延長生存時間，但靶向藥物價格昂貴、耐藥發(fā)生率較高、副作用較大，中醫(yī)藥能克服以上缺點，因此，開展中醫(yī)藥對肺動脈高壓的防治研究具有十分重要的實際意義。
　　目的:
　　觀

3、察參附益心顆粒對PAH大鼠血流動力學(xué)及血管新生的影響，并進一步了解PAH大鼠血流動力學(xué)與血管新生之間的關(guān)系;探討參附益心顆粒含藥血清對大鼠骨髓源性晚期內(nèi)皮祖細胞的增殖、遷移及旁分泌的影響;運用GO功能分析和KEGG信號通路分析，初步建立PAH調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模型，為藥物治療PAH提供新思路和新靶點。
　　材料與方法:
　　1.隨機將30只雄性Wistar大鼠分為空白組、模型組和參附益心顆粒組，每組10只。模型組和參附益心顆粒組皮下注

4、射野百合堿(60mg/kg)建立PAH模型，空白組給予皮下注射等量的生理鹽水。用改良后的右心導(dǎo)管技術(shù)測定各組大鼠藥物灌胃28天后的肺血流動力學(xué)參數(shù)，計算肺動脈平均壓，心輸出量(CO)，心指數(shù)(CI)。處死測量其右心室肥厚指數(shù)，并用RV/(LV+S)的比值表示。最后取其右下肺組織測定肺微血管密度(Microvessel density，MVD)。
　　2.隨機將60只雄性Wistar大鼠分為模型組50只和空白對照組（K組）10只，模

5、型組耳后頸背部皮下注射野百合堿進行肺動脈高壓造模，K組給予皮下注射等量的生理鹽水。模型組再隨機分為:生理鹽水組（N組）、PI3K抑制劑組（Y組）、參附益心顆粒低劑量組（D組）、參附益心顆粒中劑量組（Z組）、參附益心顆粒高劑量組（G組），處理制備含藥血清。用各組含藥血清的培養(yǎng)液對晚期內(nèi)皮祖細胞進行培養(yǎng)，24h后用流式細胞儀對其進行檢測，并用ModFitLT軟件分析得出各細胞周期情況;取處于對數(shù)生長期的晚期內(nèi)皮祖細胞，用Transwell小

6、室法檢測各組細胞遷移數(shù)目;用ELISA測空白組、模型組和參附益心顆粒組的各生長因子（Ang-Ⅱ、IGF、HGF及VEGF）。
　　3.利用基因本體數(shù)據(jù)庫(GO)和京都基因與基因組百科全書數(shù)據(jù)庫(KEGG)對PH相關(guān)基因TGF、ECM、HGF、STAT、VEGF等五種基因標(biāo)志物進行GO功能分析和KEGG信號通路分析，初步建立PAH調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模型。
　　結(jié)果:
　　1.肺血流動力學(xué)與血管新生結(jié)果:與空白組相比，模型組RVSP

7、、RVDP、mPAP、RV/(LV+S)及PVR均有明顯增高（P＜0.05），而CO和CI則顯著降低(P＜0.05)。而參附益心顆粒組較模型組，RVSP、RVDP、mPAP、RV/(LV+S)及PVR均顯著降低（P＜0.05），而CO和CI則顯著增高(P＜0.05)。提示參附益心顆粒對野百合堿誘導(dǎo)的PAH大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)有改善作用，模型組的MVD與空白組相比，明顯降低，（P＜0.05），而參附益心顆粒組的MVD顯著高于模型組（P＜0.

8、05），參附益心顆?？梢栽黾覲AH肺動脈高壓大鼠的MVD。
　　2.細胞增殖實驗結(jié)果:與Y組相比，K組、N組、D組、Z組、G組細胞周期中G1期有所減少（P＜0.05），G2+S期及S期有所增加（P＜0.05），與K組相比，D組、Z組、G組細胞周期中G1期有所減少（P＜0.05），G2+S期及S期有所增加(P＜0.05);與N組對比，D組、Z組、G組細胞周期中G1期有所減少(P＜0.05)，G2+S期及S期有所增加(P＜0.05);

9、D組、Z組、G組細胞周期中G1期有所減少(P＜0.05)，G2+S期及S期有所增加（P＜0.05），說明細胞各周期的分布在一定劑量范圍內(nèi)呈劑量依賴性;細胞遷移實驗結(jié)果:與Y組相比，K組、N組、D組、Z組、G組細胞遷移數(shù)目均增加(P＜0.05);與K組相比，D組、Z組、G組細胞遷移數(shù)目均顯可見明顯增加（P＜0.05）;D組、Z組、G組細胞遷移數(shù)目均有所增加且在一定劑量范圍內(nèi)呈劑量依賴性;ELISA檢測結(jié)果:與空白組相比，模型組Ang-Ⅱ、

10、IGF、HGF及VEGF均有明顯增高(P＜0.05);同樣，與模型組相比，參附益心顆粒組Ang-Ⅱ、IGF、HGF及VEGF也均有明顯增高（P＜0.05）。
　　3.結(jié)合GO功能分析和KEGG信號通路分析結(jié)果，初步建立了由TGF、ECM、HGF、STAT、VEGF五個相關(guān)基因及其他相關(guān)基因組成的PAH初級調(diào)控網(wǎng)絡(luò)模型。
　　結(jié)論:
　　1.參附益心顆?？筛纳埔鞍俸蠅A誘導(dǎo)的PAH大鼠的血流動力學(xué)指標(biāo)，促進血管新生。