一半湯對IgA腎病大鼠腎組織Wnt信號影響的研究.pdf

1、目的：
　　本課題主要通過動物實(shí)驗(yàn)，建立IgA腎病大鼠模型檢測中藥干預(yù)治療前后大鼠的血、尿相關(guān)指標(biāo)，以此觀察一半湯對IgA腎病大鼠血尿、蛋白尿及腎臟病理方面的影響，初步探討一半湯對 IgA腎病大鼠腎組織 Wnt信號的影響。
　　方法：
　　將56只SPF級wistar雄性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)選取10只入空白組、46只入造模組，造模組采用牛血清白蛋白（BSA）+四氯化碳（CCl4）+脂多糖（LPS）的方案復(fù)制IgA

2、腎病大鼠模型，持續(xù)12周，以BSA100 mg/L、400 mg/kg隔日灌胃，0.3 ml蓖麻油和0.1 mlCCl4每周皮下注射1次，于第6周尾靜脈注射LPS（以氯化鈉溶液配制成0.25g/L濃度）0.2 ml?？瞻捉M大鼠予以等量蒸餾水灌胃、等量生理鹽水進(jìn)行皮下注射和尾靜脈注射，頻率同造模組。造模成功的43只大鼠隨機(jī)分入模型組11只、腎炎康復(fù)片組10只、一半湯組11只、二半湯組11只。第13周開始進(jìn)行中藥干預(yù)治療，腎炎康復(fù)片組以其混

3、懸液灌胃，一半湯組以一半湯顆粒煎劑灌胃，二半湯組以二半湯顆粒煎劑灌胃，每日一次，持續(xù)8周；模型組、空白組均以等量蒸餾水灌胃。在藥物干預(yù)治療期間，模型組、一半湯組和二半湯組各有1只大鼠死亡，最終納入實(shí)驗(yàn)的50只大鼠分組情況為A組（空白組，n=10）、B組（模型組，n=10）、C組（腎炎康復(fù)片組，n=10）、D組（一半湯組，n=10）、E組（二半湯組，n=10）。檢測各組大鼠用藥前后尿紅細(xì)胞計數(shù)、24小時尿蛋白定量、尿總蛋白肌酐比（TPCR

4、）、Alb（白蛋白）、Hb（血紅蛋白）。采血后左腎組織用于電鏡、光鏡制備，右腎組織低溫凍存?zhèn)溆?，運(yùn)用 RT-PCR（反轉(zhuǎn)錄聚合酶連反應(yīng)）法檢測各組大鼠Nephrin、Wnt4、Wnt5a、β-catenin mRNA的表達(dá)及免疫組織化學(xué)法檢測Nephrin、Wnt4、Wnt5a、β-catenin蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1一般情況觀察結(jié)果：腎炎康復(fù)片組、一半湯組和二半湯組大鼠在攝食飲水、活動度方面較模型組大鼠有所改善

5、。
　　2電鏡：治療第8周末，空白組大鼠腎小球系膜區(qū)結(jié)構(gòu)清晰可見，系膜基質(zhì)分布均勻，系膜區(qū)未見明顯電子致密物沉積現(xiàn)象；模型組表現(xiàn)系膜基質(zhì)明顯增生，伴有云絮狀電子致密物沉積，足細(xì)胞足突節(jié)段性融合；腎炎康復(fù)片組可見系膜區(qū)低密度電子致密物沉積，足突結(jié)構(gòu)較為清晰；一半湯組、二半湯組腎小球系膜區(qū)均可見少量電子致密物沉積，一半湯組足突融合不明顯；二半湯組未見足突彌漫融合。
　　3光鏡：HE染色顯示，治療第8周末，空白組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)形態(tài)

6、未見明顯異常，腎小管腎間質(zhì)清晰可見；模型組大鼠腎病理改變程度不一，主要表現(xiàn)為腎小球腫脹，體積增大，腎小球內(nèi)細(xì)胞增多，系膜細(xì)胞增生多以輕中度為主，僅少數(shù)可見重度系膜細(xì)胞增生；腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組較模型組有所改善，病變明顯輕微；一半湯組中腎小球、腎小管腎間質(zhì)未見明顯異常；二半湯組主要表現(xiàn)為腎小球輕微腫脹，部分腎小管可見輕微擴(kuò)張，系膜細(xì)胞輕度增生。
　　4造模12周時，與空白組比較，成模組大鼠的尿紅細(xì)胞計數(shù)、尿蛋白水平顯著升

7、高（P＜0.05）。
　　5治療第8周各組大鼠尿紅細(xì)胞計數(shù)、24小時尿蛋白定量、TPCR、Alb、Hb結(jié)果:給予中藥干預(yù)治療第8周，與模型組比較，腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組尿紅細(xì)胞計數(shù)、24小時尿蛋白、TPCR顯著降低（P＜0.05），腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組Hb水平顯著升高（P＜0.05），腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組Alb未見明顯升高（P＞0.05）。與腎炎康復(fù)片組比較，一半湯組24小時尿蛋白、TPCR降低顯

8、著（P＜0.05）,一半湯組尿紅細(xì)胞計數(shù)降低以及Alb、Hb升高，但差異性不顯著（P＞0.05），二半湯組尿紅細(xì)胞計數(shù)、24小時尿蛋白、TPCR降低以及Alb、Hb升高均未見明顯差異（P＞0.05）。與二半湯組比較，一半湯組尿紅細(xì)胞計數(shù)、24小時尿蛋白、TPCR降低，Alb、Hb水平升高，但差異性不顯著（P＞0.05）。
　　6各組大鼠Nephrin、Wnt4、Wnt5a、β-Catenin mRNA表達(dá)結(jié)果：給藥治療第8周，與空

9、白組相比，模型組 Nephrin mRNA表達(dá)明顯下調(diào)（P＜0.05），模型組 Wnt4、Wnt5a及β-catenin mRNA表達(dá)均明顯上調(diào)（P＜0.05）。與模型組比較，腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組Nephrin mRNA表達(dá)上調(diào)均顯著（P＜0.05），腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組Wnt4、Wnt5a及β-catenin mRNA表達(dá)下調(diào)均顯著（P＜0.05）。與腎炎康復(fù)片組比較，一半湯組Nephrin mRNA表達(dá)上調(diào)顯

10、著（P＜0.05），二半湯組Nephrin mRNA表達(dá)上調(diào)不顯著（P＞0.05），一半湯組、二半湯組Wnt4、Wnt5a及β-catenin mRNA表達(dá)下調(diào)不顯著（P＞0.05）。與二半湯組比較，一半湯組Nephrin mRNA表達(dá)上調(diào)顯著（P＜0.05），一半湯組Wnt4、Wnt5a及β-catenin mRNA表達(dá)下調(diào)不顯著（P＞0.05）。
　　7各組大鼠 Nephrin、Wnt4、Wnt5a、β-catenin免疫組化

11、結(jié)果：與空白組比較，模型組Nephrin平均光密度表達(dá)顯著減少（P＜0.05），模型組Wnt4、Wnt5a、β-catenin平均光密度表達(dá)顯著增加（P＜0.05）。與模型組比較，腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組Nephrin平均光密度表達(dá)均明顯增加（P＜0.05），腎炎康復(fù)片組、一半湯組、二半湯組Wnt4、Wnt5a、β-catenin平均光密度表達(dá)均明顯減少（P＜0.05）。與腎炎康復(fù)片組相比，一半湯組Nephrin平均光密度表達(dá)增

12、加差異顯著（P＜0.05），二半湯組Nephrin平均光密度表達(dá)增加差異不顯著（P＞0.05），一半湯組、二半湯組Wnt4、Wnt5a、β-catenin平均光密度表達(dá)減少差異不顯著（P＞0.05）。與二半湯組相比，一半湯組Nephrin平均光密度表達(dá)增加顯著（P＜0.05），一半湯組Wnt4、Wnt5a、β-catenin平均光密度表達(dá)減少差異不顯著（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.運(yùn)用牛血清白蛋白、四氯化碳聯(lián)合脂多

13、糖的方法成功誘導(dǎo)IgA腎病大鼠模型。IgA腎病模型大鼠發(fā)生蛋白尿、血尿。腎炎康復(fù)片、一半湯、二半湯均可減少血尿、蛋白尿，減輕足細(xì)胞損傷，能延緩IgA腎病的進(jìn)展，且一半湯較二半湯在降低尿蛋白方面療效更佳。
　　2.一半湯較二半湯在治療蛋白尿方面的療效更佳，由此推測可能是上調(diào)Nephrin及其mRNA表達(dá)，減輕足細(xì)胞進(jìn)一步損傷，減少Wnt4、Wnt5a、β-catenin及其mRNA表達(dá)，抑制Wnt信號通路的異常激活，以此減少蛋白尿，