兩種木食性白蟻腸道內(nèi)厭氧與兼性厭氧細菌的分離純化及一株伯克氏菌的初步鑒定.pdf

1、白蟻是重要的生物質(zhì)降解者，尤其在熱帶和亞熱帶地區(qū)，在木質(zhì)素的循環(huán)利用方面扮演著至關(guān)重要的角色。白蟻體內(nèi)寄居著豐富的多種多樣的微生物，這些共生微生物被認為對于白蟻消化吸收木質(zhì)纖維素和研究宿主社會性行為進化至關(guān)重要。此外，這種共生關(guān)系不僅對宿主有利，而且對腸道內(nèi)的微生物也是有利的。白蟻腸道內(nèi)的這些共生微生物形成共生系統(tǒng)，對白蟻高效降解木質(zhì)纖維素極其重要。因此，了解白蟻腸道內(nèi)的微生物共生系統(tǒng)是非常有意義的。
　　 本文中我們選取兩種木

2、食性白蟻為研究對象，一種低等白蟻-黑胸散白蟻(Reticulitermes chinensis Snyder)和一種高等白蟻-象白蟻Nasutitermes sp.，采用6種培養(yǎng)基對這兩種白蟻腸道內(nèi)的可培養(yǎng)厭氧和兼性厭氧細菌進行分離純化，并對這兩種白蟻所得實驗結(jié)果進行比較和分析，為進一步闡述在不同種類的木食性白蟻腸道內(nèi)這些共生微生物的作用和功能及白蟻消化利用木質(zhì)纖維素的具體機制打下基礎(chǔ)。本實驗的主要研究結(jié)果如下：
　　 1.以1

3、/3TSB培養(yǎng)基對象白蟻腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭氧與兼性厭氧菌數(shù)量做了MPN測定，結(jié)果顯示每個白蟻Nasutitermes sp.腸道內(nèi)厭氧與兼性厭氧細菌的數(shù)量是1.10×105；以PY②培養(yǎng)基對象白蟻Nasutitermes sp.腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭氧與兼性厭氧纖維桿菌進行了MPN測定，結(jié)果顯示每個白蟻腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭氧與兼性厭氧纖維桿菌的數(shù)量是1.25×104個。
　　 2.選用TSB、LB、PY①和PM①等6種培養(yǎng)基對象白蟻腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭

4、氧與兼性厭氧細菌進行分離與純化，結(jié)果從象白蟻Nasutitermes sp.腸道內(nèi)共分離到55株厭氧和兼性厭氧細菌，對這些分離株16S rRNA基因序列分析表明這55株細菌屬于11個不同的屬，其中22％的細菌分離株為乳球菌屬細菌，占明顯優(yōu)勢。其次是假單胞菌屬，占分離菌總數(shù)的18％。此外，檸檬酸桿菌屬、特拉布斯氏菌屬、梭菌屬細菌也占有較高比例，分別為13％、11％和9％，其它分離菌還包括腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌和擬桿菌等。
　　

5、3.以1/3TSB培養(yǎng)基對黑胸散白蟻腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭氧與兼性厭氧菌數(shù)量進行了MPN測定，結(jié)果顯示每個白蟻腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭氧與兼性厭氧細菌的數(shù)量是3.55×104個。
　　 4.選用TSB、LB和PY②等3種培養(yǎng)基對黑胸散白蟻腸道內(nèi)可培養(yǎng)厭氧與兼性厭氧細菌進行分離與純化，結(jié)果從黑胸散白蟻腸道內(nèi)共分離到66株厭氧和兼性厭氧細菌，對這些分離株16S rRNA基因序列分析表明這66株細菌屬于7個不同的屬，其中39％的細菌分離株為腸桿菌屬細菌

6、，占絕對優(yōu)勢。其次是檸檬酸桿菌屬細菌，占分離菌總數(shù)的30％。此外，假單胞菌屬和約克氏菌屬細菌也占有較高比例，分別為15％和6％，其它分離菌還包括芽孢桿菌屬、葡萄球菌屬、乳球菌屬細菌。
　　 本研究的結(jié)果表明，棲息在黑胸散白蟻和象白蟻Nasutitermes sp.腸道內(nèi)的厭氧與兼性厭氧細菌的多樣性、種群結(jié)構(gòu)都有著顯著的差異，如特拉布斯氏菌屬、梭菌、擬桿菌、類芽孢桿菌等在黑胸散白蟻腸道內(nèi)沒有分離株出現(xiàn)；約克氏菌在象白蟻Nasuti

7、termes sP.腸道內(nèi)沒有分離株出現(xiàn)。推測這種差異可能與腸道生理生化特性、白蟻降解木質(zhì)纖維素的不同機制及白蟻腸道內(nèi)鞭毛蟲的有無等密切相關(guān)。
　　 5.從形態(tài)學、生理生化等方面對從黑胸散白蟻腸道內(nèi)分離的一株伯克霍爾德氏菌(TS-14)進行了初步研究。該細菌為革蘭氏陰性細菌，呈直桿狀(長約1-2μm，寬0.5μm)，菌落圓形，濕潤，乳白色不透明，有光澤，光滑，邊緣比較整齊，無鞭毛，不具有運動性。菌株TS-14最適培養(yǎng)條件為：耐鹽