PTH1-34對AGEs抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的逆轉(zhuǎn)作用.pdf

1、目的：
　　觀察甲狀旁腺激素（PTH1-34）是否可以通過抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）、骨硬化蛋白（SOST）,逆轉(zhuǎn)晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）成骨分化的作用。
　　方法：
　　1.以4周雄性SD大鼠的股骨、脛骨為原料分離培養(yǎng)BMSCs。
　　2.隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組(BSA組)，用不同濃度AGEs（25ug/mL、50ug/mL、100ug/mL、200ug/mL）作

2、用細(xì)胞72h后，MTT法測比較細(xì)胞增殖。接著選用200ug/ml AGEs和相應(yīng)濃度的牛血清白蛋白（BSA）干預(yù)，測2-7天細(xì)胞增殖，成骨誘導(dǎo)第7天逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測TGF-βmRNA、骨硬化蛋白mRNA的表達(dá)，21天茜素紅染色比較礦化結(jié)節(jié)形成差異。
　　3.使用間歇給藥方式在AGEs干預(yù)的情況下，前6小時(shí)加入10-8mmol/LPTH，以48小時(shí)為一個(gè)循環(huán)。再次檢測上述指標(biāo)表達(dá)水平（LSD-t檢驗(yàn)）。

3、>　　結(jié)果：
　　1.P3代BMSCs呈形態(tài)均一的長梭形、紡錘形，折光性強(qiáng)。
　　2.隨著濃度增加AGEs組較BSA組明顯抑制BMSCs增殖，在濃度100ug/ml～200ug/ml時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.AGEs單獨(dú)給藥可以抑制大鼠BMSCs增殖（P＜0.05），但加入PTH1-34干預(yù)后可以逆轉(zhuǎn)AGEs抑制BMSCs增殖的作用（P＜0.05），干預(yù)時(shí)間增加，差異顯著。AGEs作用骨髓間充質(zhì)干

4、細(xì)胞7天后，測得SOST、TGF-βmRNA表達(dá)量增加（P＜0.05），而PTH1-34干預(yù)后可以抑制SOST、TGF-βmRNA表達(dá)的增加（P＜0.05）。SOST，TGF-βmRNA表達(dá)量在AGEs組和PTH+AGEs組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=23.98， P=0.00；F=17.61，P=0.00）。
　　4.茜素紅染色觀察AGEs組礦化結(jié)節(jié)較BSA組明顯減少，PTH干預(yù)可部分逆轉(zhuǎn)其抑制作用。
　　結(jié)論：