辛伐他汀激活棕色脂肪活性改善奧氮平引起的大鼠體重與代謝異常的初步研究.pdf

1、目的：辛伐他汀可以控制高脂攝食肥胖模型的體重增長(zhǎng)，降低血脂血糖水平并改善胰島素的敏感性等。但辛伐他汀是否能激活棕色脂肪產(chǎn)熱活性來干預(yù)奧氮平引起的體重增長(zhǎng)與代謝失衡尚未有報(bào)道。本研究選擇斷奶幼鼠模擬幼年機(jī)體的代謝功能，通過檢測(cè)辛伐他汀對(duì)奧氮平給藥后大鼠的體重、攝食、血脂血糖、自發(fā)活動(dòng)與棕色脂肪活性等方面變化的影響來研究辛伐他汀對(duì)于奧氮平引起的體重增長(zhǎng)及代謝異常的干預(yù)功能。
　　方法：⑴選擇36只斷奶雌性幼鼠（體重：45-55 g），

2、并將它們隨機(jī)分配為兩個(gè)組（n=18），并分別給予3.0 mg/kg/day奧氮平（t.i.d.）與空白糖丸連續(xù)14天，期間每?jī)商鞕z測(cè)大鼠體重、攝食、肛溫變化。藥物處理14天后，檢測(cè)血漿 TG、TC與空腹血糖值。⑵將上述大鼠分為四組：空白組隨機(jī)平均分為空白對(duì)照組與辛伐他汀組（10.0 mg/kg/day），奧氮平組隨機(jī)平均分為奧氮平組（3.0 mg/kg/day, t.i.d.）與聯(lián)合給藥組（奧氮平：3.0 mg/kg/day, t.i.

3、d.，辛伐他?。?0.0 mg/kg/day），繼續(xù)給藥35天，每?jī)商鞕z測(cè)大鼠體重、攝食、肛溫變化；⑶在聯(lián)合給藥第30天時(shí)，進(jìn)行大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)。將大鼠放入黑色的開口盒中（50×50×50 cm3），普通攝影機(jī)跟蹤拍攝大鼠活動(dòng)，每只大鼠拍攝25分鐘，并用Noldus Ethovision分析拍攝的大鼠活動(dòng)錄像分析大鼠的平均速率與總距離來反映大鼠的自發(fā)活動(dòng)的變化；⑷辛伐他汀與奧氮平聯(lián)合給藥中期（第20天）與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，測(cè)血漿 TG、TC與

4、空腹血糖值；在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)束后檢測(cè)棕色脂肪與白色脂肪的重量；將棕色脂肪進(jìn)行冷凍切片并進(jìn)行油紅染色；⑸采用RT-qPCR及Western blotting檢測(cè)棕色脂肪產(chǎn)熱相關(guān)基因與下丘腦和腦干能量代謝相關(guān)基因的mRNA與蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：①奧氮平單獨(dú)給藥兩周后，奧氮平給藥大鼠的體重明顯高于空白對(duì)照組（99.5±5.7 g vs.79.5±4.5 g, P＜0.05）；與空白對(duì)照組相比，奧氮平增加大鼠的攝食量（40.2±3.6

5、g vs.33.5g±2.5 g, P＜0.05）；聯(lián)合給藥5周后，辛伐他汀與奧氮平聯(lián)合用藥的大鼠體重與單獨(dú)喂食奧氮平組相比（205.0±11.1 g vs.233.5±10.6 g, P＜0.05）明顯下降；與空白對(duì)照組相比，辛伐他汀不影響大鼠攝食量（P＞0.05）。②根據(jù)前兩周奧氮平單獨(dú)給藥后大鼠空腹血漿甘油三酯、膽固醇與血糖值的檢測(cè)可知，奧氮平組的甘油三酯（1.02±0.06 mmol/L vs.0.73±0.02 mmol/L,

6、 P＜0.01）、總膽固醇值（2.40±0.04 mmol/L vs.2.28±0.03 mmol/L, P＜0.05）與血糖值（7.74±0.13 mmol/L vs.7.39±0.11 mmol/L, P＜0.05）明顯高于空白對(duì)照組。聯(lián)合給藥中期（第20天）檢測(cè)表明，聯(lián)合給藥的血脂血糖值與奧氮平單獨(dú)給藥組相比均有明顯下降（P＜0.05）。聯(lián)合給藥35天后，奧氮平與辛伐他汀聯(lián)合給藥組的甘油三酯（0.84±0.03 mmol/L vs

7、.1.27±0.04 mmol/L, P＜0.01）、總膽固醇值（2.43±0.05 mmol/L vs.2.74±0.06 mmol/L, P＜0.01）與血糖值（7.47±0.03 mmol/L vs.7.95±0.18 mmol/L, P＜0.01）明顯低于奧氮平組。辛伐他汀組的甘油三酯（0.59±0.06 mmol/L vs.0.85±0.06 mmol/L, P＜0.05）與總膽固醇值（2.22±0.10 mmol/L vs.

8、2.45±0.03 mmol/L, P＜0.05）低于空白對(duì)照，但血糖值與空白對(duì)照相比無明顯差別（P＞0.05）。大鼠體重增長(zhǎng)值與總膽固醇值呈顯著性正相關(guān)（r=0.458, P＜0.01）。③奧氮平給藥大鼠的總距離低于空白對(duì)照組（4091.3±200.6 cm vs.4998.3±157.6 cm, P＜0.05）且平均速率也低于空白對(duì)照組（2.7±0.1 cm/s vs.3.3±0.1 cm/s, P＜0.05）。但辛伐他汀對(duì)于奧大鼠

9、的總距離與平均速率的影響并不明顯（ both P＞0.05）。④奧氮平單獨(dú)給藥組的大鼠體溫與空白對(duì)照組相比下降明顯（37.41±0.03℃ vs.37.64±0.02℃, P＜0.01）。辛伐他汀與奧氮平聯(lián)合給藥5周后，與空白對(duì)照組相比，辛伐他汀對(duì)大鼠體溫的調(diào)節(jié)不明顯，但在聯(lián)合給藥后期（第26天后），體溫相比于奧氮平單獨(dú)給藥組有上升趨勢(shì)，但沒有出現(xiàn)顯著性差異（P＞0.05）。⑤奧氮平作用后，大鼠的產(chǎn)熱活動(dòng)下降，辛伐他汀促進(jìn)產(chǎn)熱活動(dòng)的增加

10、，進(jìn)而我們對(duì)大鼠體內(nèi)重要調(diào)節(jié)產(chǎn)熱的器官——棕色脂肪和白色脂肪進(jìn)行研究。相較空白對(duì)照組，奧氮平組的白色脂肪積累明顯增加（7.30±0.58 g vs.6.14±0.18 g, P＜0.05）。聯(lián)合給藥組比奧氮平組的白色脂肪積累明顯減少（5.67±0.39 g vs.7.30±0.58 g, P＜0.05）。聯(lián)合給藥組的棕色脂肪比于奧氮平組有明顯增加（0.69±0.04g vs.0.59±0.06 g, P＜0.05）。另外，根據(jù)棕色脂肪切

11、片油紅染色可知，奧氮平使棕色脂肪的脂滴變大，但辛伐他汀與奧氮平聯(lián)合給藥組的脂滴大小與空白對(duì)照組無明顯變化。⑥奧氮平組相比于空白對(duì)照組，UCP1的轉(zhuǎn)錄水平顯著下調(diào)了～44％（P＜0.05），PGC-1α下調(diào)了～40%（P＜0.05）而PPARγ下調(diào)了～55%（P＜0.05）。相比于奧氮平組，奧氮平與辛伐他汀聯(lián)合給藥組可以上調(diào)UCP1的基因轉(zhuǎn)錄水平（144%±14%vs.56%±11%, P＜0.01）。聯(lián)合給藥組在PGC-1α的轉(zhuǎn)錄水平上

12、相比于奧氮平組也有明顯提升（103%±13%vs.56%±11%, P＜0.05）。辛伐他汀聯(lián)合給藥組與奧氮平單獨(dú)給藥組相比，PPARγ的轉(zhuǎn)錄水平明顯上調(diào)（75%±14%vs.45%±6%, P＜0.05）。而辛伐他汀組PRDM16的轉(zhuǎn)錄水平相比于空白對(duì)照組相比有上調(diào)（141%±11%vs.100%±22%, P＜0.05）。⑦與空白對(duì)照組相比，下丘腦的POMC與腦干TH在奧氮平的作用下分別降低了～36%（P＜0.05）與～45%（P＜

13、0.05），辛伐他汀使POMC的表達(dá)水平顯著上升了～99%（P＜0.01）。聯(lián)合給藥組與奧氮平組相比，TH轉(zhuǎn)錄水平有明顯上升（108%±9%vs.55%±14%, P＜0.05）。
　　結(jié)論：奧氮平使大鼠體重增長(zhǎng)明顯，糖脂代謝與能量代謝失衡。辛伐他汀不僅可以調(diào)節(jié)血脂血糖水平，還能通過提高棕色脂肪的活性改善奧氮平引起的體重增長(zhǎng)與代謝異常。相關(guān)性分析顯示，辛伐他汀的降血脂作用可能與激活棕色脂肪相關(guān)。這些結(jié)果為臨床上治療二代抗精分藥物所