尿毒癥血清激活NLRP3炎癥體信號通路介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　體外培養(yǎng)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，明確尿毒癥血清可激活 NLRP3炎癥體信號通路介導(dǎo)VSMCs增殖，并探索NLRP3抑制劑對VSMCs增殖的抑制作用。
　　方法：
　　收集尿毒癥患者及健康人血清，以10％的血清濃度作用于 VSMCs，將實(shí)驗(yàn)分為4組：尿毒癥血清組（U）、健康血清組（N）、尿毒癥血清+格列苯脲組（U+Gli）、健康血清+格列本脲組（N+Gli）。
　　1.VSMCs培養(yǎng)與處理：
　　人主

2、動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（HASMCs）購于美國ATCC公司，用10%尿毒癥血清刺激，以健康血清作對照；進(jìn)一步嘗試格列本脲對VSMCs增殖的抑制作用。
　　2. VSMCs NLRP3 mRNA表達(dá)水平檢測：
　　RT-PCR方法檢測NLRP3 mRNA表達(dá)量。
　　3.VSMCs NLRP3、Caspase-1活性檢測：
　　Western Blots法檢測NLRP3、Caspase-1 p20蛋白表達(dá)量。
　　4

3、.VSMCs增殖活性檢測：
　　使用ELISA檢測試劑盒測定溴脫氧尿苷(Brdu)攝取量，通過分析Brdu攝取量來判斷VSMCs的增殖活性。
　　結(jié)果：
　　與健康血清組比較，尿毒癥血清組VSMCs NLRP3 mRNA表達(dá)量增多，NLRP3與Caspase-1 p20蛋白表達(dá)量也升高，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中Brdu含量增多，兩組對照分析，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而格列本脲處理前后，尿毒癥血清組和健康血清組相比較，

4、NLRP3 mRNA、NLRP3蛋白、Caspase-1 p20蛋白表達(dá)量均減少， Brdu攝取量也隨之減少，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　尿毒癥血清通過激活 NLRP3炎癥復(fù)合體信號通路，可以促進(jìn)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖，而格列苯脲可通過抑制 NLRP3炎癥體活化進(jìn)而抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖。
　　本課題為國家青年科學(xué)基金“慢性腎病激活NLRP3炎癥體信號通路介導(dǎo)平滑肌細(xì)胞增殖參與慢性腎病相關(guān)新