周期性應(yīng)變導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增殖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制.pdf

1、目的:研究周期性應(yīng)變條件下VSMC的力學(xué)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)徑路,探討周期性應(yīng)變導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)制.材料與方法:利用脈動(dòng)膜式張應(yīng)力系統(tǒng),給離體培養(yǎng)的成年SD大鼠胸主動(dòng)脈SMC施加周期性應(yīng)變.①觀察周期性應(yīng)變條件下VSMC形態(tài)、細(xì)胞增殖及DNA合成的變化;②考馬斯亮藍(lán)染色觀察微絲空間結(jié)構(gòu)的變化,免疫熒光細(xì)胞化學(xué)及激光共聚焦技術(shù)檢測細(xì)胞骨架蛋白中踝蛋白、樁蛋白的表達(dá)變化,免疫細(xì)胞化學(xué)檢測踝蛋白、樁蛋白的磷酸化情況;③RGD阻斷細(xì)胞外基質(zhì)與整合

2、素的結(jié)合,觀察VSMC的增殖、踝蛋白、樁蛋白的磷酸化以及微絲空間結(jié)構(gòu)變化;Genistein和Cytochalasin B分別阻斷細(xì)胞骨架蛋白的磷酸化與細(xì)胞骨架裝配觀察VSMC的增殖情況.結(jié)果:①8﹪的周期性應(yīng)變抑制VSMC生長和DNA合成;14﹪的周期性應(yīng)變明顯促進(jìn)VSMC增殖和DNA的合成,24h和48h其DNA合成分別是對照組的1.4和1.8倍.②14﹪的周期應(yīng)變條件下,細(xì)胞發(fā)生與應(yīng)力加載方向垂直的重排.VSMC發(fā)生明顯的形變,形

3、態(tài)指數(shù)減小,鋪展面積、周長和長軸在加載0-6小時(shí)增加,12-24小時(shí)減小并趨于穩(wěn)定.同時(shí)微絲減少,排列紊亂,向細(xì)胞膜側(cè)靠近,踝蛋白和樁蛋白的表達(dá)增加,發(fā)生快速磷酸化.③RGD能抑制14﹪周期性應(yīng)變作用下的VSMC增殖,踝蛋白、樁蛋白的磷酸化和微絲重組.Cytochalasin B及Genistein能阻斷周期性應(yīng)變作用下的VSMC增殖.結(jié)論:細(xì)胞外基質(zhì)-整合素-細(xì)胞骨架蛋白-細(xì)胞骨架徑路是周期性應(yīng)變條件下VSMC增殖的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.