ZBTB蛋白家族成員-ZBTB9的生物學(xué)功能初探.pdf

1、ZBTB蛋白家族是一類含有C2H2Küppel鋅指基序和BTB/POZ結(jié)構(gòu)域的DNA結(jié)合蛋白，具有基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡和功能調(diào)節(jié)等生物學(xué)過程中發(fā)揮著重要作用。本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)數(shù)據(jù)庫序列信息結(jié)合RT-PCR技術(shù)克隆到一個ZBTB家族成員ZBTB9(NM_152735.3)。目前，國內(nèi)外還未見ZBTB9基因功能研究的相關(guān)報(bào)道，故本文對該基因信息展開了初步探索。
　　 生物信息學(xué)分析表明:ZBTB9定位于6p21.32

2、;由2個外顯子和1個內(nèi)含子組成，外顯子與內(nèi)含子的交界符合GT-AG規(guī)則;含有1421bpORF，編碼一個由473個氨基酸組成，分子量約為50.6KD的蛋白。SMART分析表明，ZBTB9蛋白N端含有1個BTB/POZ結(jié)構(gòu)域，C端含有兩個C2H2型鋅指基序。借助生物學(xué)軟件ClustalX對七種物種的ZBTB9蛋白進(jìn)行同源性比對和進(jìn)化樹分析表明，ZBTB9蛋白與大鼠、小鼠、猩猩、獼猴、牛和非洲爪蟾六種物種的ZBTB9蛋白具有較高的同源性，且

3、人ZBTB9基因與猩猩ZBTB9基因的分子進(jìn)化距離最近，親緣關(guān)系最為密切。
　　 通常蛋白質(zhì)需轉(zhuǎn)運(yùn)到特定的亞細(xì)胞區(qū)域才能行使其生物學(xué)活性。我們通過構(gòu)建GFP-ZBTB9及其截短的融合表達(dá)載體分析其亞細(xì)胞分布，結(jié)果表明:ZBTB9蛋白定位于細(xì)胞核且呈斑點(diǎn)狀分布;缺失鋅指基序的ZBTB9蛋白呈核周斑點(diǎn)狀分布，而缺失BTB結(jié)構(gòu)域的ZBTB9蛋白均勻分布于細(xì)胞核。由此可見，BTB結(jié)構(gòu)域?qū)BTB9蛋白的斑點(diǎn)狀分布起關(guān)鍵作用。
　　

4、 為了解ZBTB9蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用，我們利用一系列信號通路報(bào)告載體，通過雙熒光素酶報(bào)告基因檢測系統(tǒng)分析ZBTB9對相關(guān)信號通路的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果表明，ZBTB9顯著激活HSE的轉(zhuǎn)錄活性。后續(xù)我們構(gòu)建了一系列ZBTB9截短表達(dá)載體，進(jìn)一步分析ZBTB9不同功能區(qū)段的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。結(jié)果表明:BTB結(jié)構(gòu)域和鋅指基序單獨(dú)存在時均能發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用，且BTB結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄激活作用與ZBTB9的激活作用相當(dāng);鋅指基序的轉(zhuǎn)錄激活作用卻比ZBTB9

5、的激活作用強(qiáng)約100％。由此我們推測，ZBTB9可能在HSPs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控及HSE信號通路中發(fā)揮激活作用，其中鋅指基序發(fā)揮著重要作用，進(jìn)而影響細(xì)胞的一系列生命活動。通常HSE信號通路的激活會促進(jìn)各種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖，故ZBTB9可能在腫瘤細(xì)胞的增殖中發(fā)揮功能。
　　 已有研究表明ZBTB家族成員大多數(shù)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。通過采用RT-PCR技術(shù)檢測ZBTB9基因在宮頸癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞和胃癌細(xì)胞中的表達(dá)量，我們