基于胚發(fā)育相關(guān)基因建立MAT載體系統(tǒng)的研究.pdf

1、多元自主轉(zhuǎn)化MAT載體系統(tǒng)(Multi-Auto-Transformation vector system)是一種新的轉(zhuǎn)化方法，該系統(tǒng)運用癌基因(IPT或ROL基因)作為選擇目標基因。該系統(tǒng)最大的優(yōu)點是：IPT或ROL基因是激素代謝相關(guān)基因，可以有效的提高難再生物種的轉(zhuǎn)化效率，用于轉(zhuǎn)基因植株的增值和再生。
　　研究發(fā)現(xiàn)LEC1(LEAFY COTYLEDON1)基因，可以誘導體細胞向胚性細胞的轉(zhuǎn)變，當該基因被置于一組成型表達啟動子

2、控制下，可以成功誘導體細胞發(fā)育成胚胎；STM(SHOOT MERISTEMLESS)基因是控制分生組織形成的重要調(diào)控基因，在莖尖分生組織和未分化的細胞的建立和維持中起到重要的作用，因此LEC1基因和STM基因是器官發(fā)生和胚胎發(fā)育的重要調(diào)控因子。本實驗以期以LEC1基因和STM基因作為MAT載體系統(tǒng)的選擇標記基因獲得易于成胚或芽的再生轉(zhuǎn)基因植株；以期基于胚發(fā)育相關(guān)基因建立MAT載體系統(tǒng)的初步研究。
　　目的：本研究通過對大葉落地生根

3、和擬南芥中胚發(fā)育相關(guān)基因KdLEC1,KdSTM,AtKNATM功能分析，進一步研究這些基因?qū)χ参锱咛グl(fā)育或芽的再生是否具有一定的促進作用，是否可以利用胚發(fā)育相關(guān)基因發(fā)展新型MAT載體系統(tǒng)。
　　方法：本研究通過RT-PCR技術(shù)，從大葉落地生根和擬南芥中克隆胚發(fā)育相關(guān)基因，命名為KdLEC1,KdSTM,AtKNATM。將構(gòu)建好的p35S::KdLEC1/p35S::KdSTM/p35S::AtKNATM載體通過農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)

4、化煙草，花滴法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，探索LEC1基因和STM基因?qū)D(zhuǎn)基因植株胚胎發(fā)育或芽的再生是否有作用；棉花莖尖作為受體，采用玻璃粉劃傷法對其侵染，尋求一條較佳的獲得轉(zhuǎn)基因再生植株的途徑。
　　結(jié)果與結(jié)論：從大葉落地生根中克隆到胚發(fā)育相關(guān)基因，構(gòu)建過表達載體，通過農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化煙草，獲得煙草轉(zhuǎn)基因植株。對轉(zhuǎn)基因植株和野生型植株煙草的表型進行了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)基因煙草植株同野生型煙草的表型有很大的差異，轉(zhuǎn)基因型煙草的葉片濃綠，早期就