粗毛栓菌漆酶的生化和分子生物學(xué)研究.pdf

1、利用RB亮藍(lán)平板檢測方法發(fā)現(xiàn)，粗毛栓菌有較強的漆酶產(chǎn)生能力，其顯色反應(yīng)明顯強于黃孢原毛平革菌。對液體培養(yǎng)條件下粗毛栓菌產(chǎn)生漆酶的研究表明，2％以下的胰蛋白胨能明顯促進漆酶的產(chǎn)生；高碳(1％葡萄糖)條件下產(chǎn)生的漆酶明顯高于低碳條件;高濃度銅離子(200μmmol/L)能有效促進該菌漆酶的產(chǎn)生；胰蛋白胨—葡萄糖培養(yǎng)基(TG)和細(xì)菌用蛋白胨-2％葡萄糖培養(yǎng)基(PG)產(chǎn)生的漆酶活性最高。　　研究了59種芳香類化合物對粗毛栓菌漆酶產(chǎn)生的影響，發(fā)

2、現(xiàn)27種對漆酶產(chǎn)生有促進作用，其中對苯二酚作用最強；另外32種化合物在不同程度上抑制漆酶的產(chǎn)生，對硝基苯酚和2，6-二氯苯酚的抑制作用最強?！　∮梅亲冃跃郾０纺z電泳活性染色法研究了12種培養(yǎng)基對粗毛栓菌漆酶同工酶譜的影響。通過硫酸銨沉淀，DEAE-sepharoseFastFlow陰離子交換柱層析，SephadexG-100凝膠過濾層析和改進的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳等方法，從粗毛栓菌分泌的胞外蛋白中分離了14種漆酶同工酶(依次

3、命名為Lac1至Lac14)，純化產(chǎn)物通過SDS-PAGE電泳檢查，均已經(jīng)達到了電泳純?！　?個漆酶基因片段的核苷酸及其編碼的氨基酸序列進行同源性分析。lacA序列編碼由496個氨基酸殘基組成的漆酶，結(jié)構(gòu)中含有漆酶特有的3種類型的Cu2+結(jié)合位點，4個N-糖基化位點以及2個二硫鍵位點。同源性分析結(jié)果顯示，該cDNA序列出與其它生物的漆酶基因有較高的同源性，但差異也是明顯的?！　∫灾亟M質(zhì)粒pGEM-1500a為模板進行PCR擴增，反