生物轉(zhuǎn)化法制備11α，17α-二羥基黃體酮的研究.pdf

1、皮質(zhì)激素在甾體激素藥物中所占分量很大，而C11位引入α-羥基是皮質(zhì)激素生產(chǎn)工藝中的重要反應(yīng)。經(jīng)過幾十年的發(fā)展，甾體藥物的生產(chǎn)工藝正在由皂素時代進入植物甾醇時代，C11位α-羥基化所用的底物也發(fā)生了改變。11α,17α-二羥基黃體酮是新工藝路線中重要的中間體，但是關(guān)于該化合物的制備方法并未見專門報道，更沒有工業(yè)化生產(chǎn)。
　　本文利用赭曲霉生物轉(zhuǎn)化方法，以17α-羥基黃體酮底物，在C11位引入α-羥基，得到11α,17α-二羥基黃體酮

2、。本文的主要研究內(nèi)容如下：
　　通過實驗，從幾種有代表性的、具有C11位α-羥基化能力的微生物中優(yōu)選出赭曲霉作為出發(fā)菌株，進行17α-羥基黃體酮的初步生物轉(zhuǎn)化研究，并對產(chǎn)物進行檢測，結(jié)合文獻、液質(zhì)聯(lián)用、核磁共振等手段證明了產(chǎn)物就是11α,17α-二羥基黃體酮。并確定化驗方法。
　　用單因素法對發(fā)酵培養(yǎng)基組分、控制參數(shù)以及投料轉(zhuǎn)化參數(shù)進行了優(yōu)化，結(jié)果表明：以葡萄糖作碳源，酵母膏作氮源，磷酸鹽用量控制在0.20％時轉(zhuǎn)化結(jié)果較好；

3、溫度28±1℃，pH值6.4-6.7，在搖瓶條件下提高溶氧有利于轉(zhuǎn)化；投料濃度0.5-1.0%，DMF作助溶劑，添加吐溫-80作為乳化劑，產(chǎn)物轉(zhuǎn)化率達到90%。
　　對發(fā)酵下游工藝進行了探索，通過對底物和產(chǎn)物在不同溶劑中的溶解度進行研究，確定了后處理的工藝。提取溶劑用丙酮比較適合；產(chǎn)物的分離純化采用氯仿和甲苯4:1(v/v)的混和溶劑。
　　對小試優(yōu)化后的工藝進行中試放大研究，連續(xù)三批收率大于80%，純度達99%。