華支睪吸蟲gst2cstp22.3基因的克隆表達(dá)及其免疫學(xué)功能初步研究

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文華支睪吸蟲GST2-CsTP22.3基因的克隆表達(dá)及其免疫學(xué)功能初步研究姓名：李彩霞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：余新炳20090605中山大學(xué)碩士學(xué)位論文 華支睪吸蟲G S T 2 ．C s T P 2 2 ．3 基因克隆表達(dá)及其免疫學(xué)功能初步研究粗抗原是免疫診斷試劑盒研制的必然趨勢，關(guān)于華支睪吸蟲免疫診斷抗原的篩選和評價(jià)是國內(nèi)外華支睪吸蟲病研究的重點(diǎn)。華支睪吸蟲表膜脫落分子可以進(jìn)入血液循環(huán)，刺激

2、宿主產(chǎn)生抗體，而且與宿主肝膽管直接接觸的蟲體表膜抗原可以引起局部粘膜反應(yīng)，因此表膜抗原在華支睪吸蟲免疫、致病中有重要作用。本實(shí)驗(yàn)室前期通過間接E L I S A 方法評價(jià)6 種華支睪吸蟲重組蛋白的免疫診斷價(jià)值，發(fā)現(xiàn)華支睪吸蟲成蟲谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶2 ( G S T 2 ) 的特異性比較高，但敏感性仍不甚理想。隨著基因工程技術(shù)的進(jìn)展，可以根據(jù)需要對基因進(jìn)行連接以提高重組抗原的診斷敏感性。為此，我們利用生物信息學(xué)技術(shù)，對本室構(gòu)建的華支睪吸蟲成蟲

3、c D N A 文庫進(jìn)行篩選，從中挑選具有診斷價(jià)值的表膜蛋白基因，將其與G S T 2 構(gòu)建融合蛋白，并對融合蛋白的診斷價(jià)值進(jìn)行初步驗(yàn)證，期望為華支睪吸蟲病的診斷做出積極有益的探索。研究目的識別、克隆華支睪吸蟲成蟲谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶2 ( G S T 2 ) 及表膜蛋白( T P 2 2 ．3 ) ，并將G S T 2 和T P 2 2 ．3 共同克隆至U p E T 一3 2 a ( + ) 載體上，構(gòu)建融合蛋白。通過間接E L I S

4、A方法評價(jià)該融合蛋白檢測華支睪吸蟲病流行區(qū)的正常血清、感染血清中的I g G 4 亞類的敏感性和特異性，為華支睪吸蟲免疫診斷抗原的篩選探索新的途徑。研究方法1 ．T P 2 2 ．3 基因的生物信息學(xué)分析華支睪吸蟲成蟲c D N A 質(zhì)粒文庫進(jìn)行表達(dá)序列標(biāo)簽( e x p r e s s i o n s e q u e n c e t a g ，E S T ) 隨機(jī)測序和u n i g e n e 歸并、拼接，獲得多個(gè)華支睪吸蟲成蟲全長