nkx3.1表達(dá)下調(diào)對前列腺癌lncap細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

1、Y9 5 乏1 7 9後旦火擎學(xué)校代碼：1 0 2 4 6學(xué) 號：0 3 2 1 i 1 3 6 7碩士學(xué)位論文套玨∞．1 表．這下調(diào)對前列腺癌D 屺護(hù)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響院系( 所) ：專 業(yè)：姓 名：指導(dǎo)教師：完成日期：金山醫(yī)院外科學(xué)耿江陳剛副教授2 0 0 6 年4 月●●◆◆N 1 0 【3 ．1 表達(dá)下調(diào)對前列腺癌L N C a P 細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響摘要前列腺癌是西方國家男性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤。在美國，前列腺癌占男

2、性惡性腫瘤發(fā)病率的首位和死亡率的第二位，僅次于肺癌。隨著老年人口數(shù)量的增長和診斷水平的提高，我國前列腺癌占住院病人的比例也逐年增加，嚴(yán)重威脅中老年男性的健康、生命和生活質(zhì)量?，F(xiàn)在許多醫(yī)療工作者正致力于前列腺癌防治的研究，并提出了許多防治前列腺癌的新方法。2 0 0 3 年一項(xiàng)為期7 年有1 8 8 8 2 人參加的臨床試驗(yàn)表明用于治療前列腺增生癥的2 型5 Ⅱ還原酶抑制劑非那雄胺能夠抑制前列腺癌的發(fā)生，顯示了非那雄胺用于前列腺癌防治的巨

3、大潛力。我們采用基因芯片研究了非那雄胺作用前后前列腺癌L N C a P 細(xì)胞的基因表達(dá)變化，篩選出了一些與非那雄胺的抑癌作用有密切關(guān)系的基因，其中有同源框基因N K X 3 ．1 ，腫瘤抑制基因P T E N 等( 發(fā)表于中華醫(yī)學(xué)雜志2 0 0 5 年2 l 期) 。有研究表明同源框基因N K X 3 ．1 在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用，N K X 3 ．1 的丟失與前列腺癌的癌前病變一一前列腺上皮內(nèi)瘤變( P I N ) 有密

4、切關(guān)系。為了進(jìn)一步明確N K X 3 ．1 在前列腺癌中的重要作用，我們采用目前研究基因功能的最有力的R N A 干擾技術(shù)使前列腺癌細(xì)胞L N C a P 中的N K X 3 ．1 表達(dá)下調(diào)，觀察N K X 3 ．1 表達(dá)下調(diào)對L N C a P 細(xì)胞的影響，為N K X 3 ．1 作為有前途的前列腺癌腫瘤標(biāo)志物和基因治療的靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。目的構(gòu)建針對N K X 3 ．1 的短發(fā)卡R N A ( s h R N A ) 質(zhì)粒載體，觀察

5、其介導(dǎo)L N C a P 細(xì)胞中N K X 3 ．1 表達(dá)下調(diào)以及對細(xì)胞增殖生長、細(xì)胞周期、侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響和對L N C a P 細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶2 ( m a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e ，M M P 2 ) 表達(dá)的影響。材料與方法根據(jù)專利算法設(shè)計(jì)了兩條能夠編碼N K X 3 ．1 s h R N A 的寡核苷酸單鏈以及一條編碼陰性s h R N A 的寡核苷酸單鏈，與p R

6、 N A T —U 6 ．1 ／N e o 質(zhì)粒進(jìn)行重組，并行雙酶切鑒定及D N A 測序。隨后重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雄激素敏感性前列腺癌細(xì)胞系L N C a P ，在不同時(shí)間點(diǎn)采用R T —P C R 和w e s t e r n b l o t 在N K X 3 ．1 m R N A 和蛋白質(zhì)水平檢測。進(jìn)一步篩選N K X 3 ．1 表達(dá)缺失的L N C a P 單克隆細(xì)胞。比較N K X 3 ．1 表達(dá)缺失前后I j { 『列腺癌細(xì)胞L N