醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)重點(diǎn)

1、第一章概念：基因：基因：指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列及表達(dá)這些信息所需的全部核苷酸序列，由核酸的一些特定堿基序列構(gòu)成的表達(dá)遺傳信息的功能單位。結(jié)構(gòu)基因：結(jié)構(gòu)基因：基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列。能參與代謝活動(dòng)或維持組織結(jié)構(gòu)。調(diào)節(jié)基因：調(diào)節(jié)基因：基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的DNA序列。調(diào)控其他基因的表達(dá)?；蚪M基因組C值矛盾：值矛盾：C值是一種生=物基因組恒定的DNA含量，反映基因組大小，真核生物基因組的大小并非都與其進(jìn)化程

2、度呈正相關(guān)的現(xiàn)象為C值矛盾。RFLP（限制性片段長度多態(tài)性）：（限制性片段長度多態(tài)性）：同一物種不同個(gè)體基因組存在DNA多態(tài)性，且約10％多態(tài)性位點(diǎn)導(dǎo)致限制性酶切位點(diǎn)的形成或消失，因而所含限制性酶切位點(diǎn)的數(shù)目和分布不同，其限制性片段的種類和長度也不同。SNP（單核苷酸多態(tài)性）：（單核苷酸多態(tài)性）：指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸變異產(chǎn)生的DNA多態(tài)性。真核細(xì)胞和原核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)的差異（斷裂基因）真核細(xì)胞基因組特點(diǎn)：如非編碼序列占絕大部分、重

3、復(fù)序列、基因家族真核細(xì)胞基因組特點(diǎn)：如非編碼序列占絕大部分、重復(fù)序列、基因家族：染色體DNA是線性分子，含復(fù)制起點(diǎn)、著絲粒DNA、端粒等功能元件；細(xì)胞核DNA形成染色體結(jié)構(gòu)，染色體數(shù)目一定，體細(xì)胞一般是二倍體；基因組序列中僅有不到10％是編碼序列；基因在基因組中散在分布；基因組序列中包含高度重復(fù)序列、中度重復(fù)序列等大量重復(fù)序列；蛋白質(zhì)的編碼序列大都屬于單一序列；存在各種基因家族；含大量轉(zhuǎn)座元件。原核細(xì)胞基因組特點(diǎn)：如編碼序列占絕大部分、

4、類核、質(zhì)粒：原核細(xì)胞基因組特點(diǎn)：如編碼序列占絕大部分、類核、質(zhì)粒：基因組DNA通常為單一閉環(huán)雙鏈分子，只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)；基因組序列的50％是編碼序列；非編碼序列主要是一些調(diào)控序列；所含基因的數(shù)目比病毒多，并且多形成操縱子結(jié)合。病毒基因組特點(diǎn)：如重疊基因：病毒基因組特點(diǎn)：如重疊基因：所含核酸的種類與結(jié)構(gòu)、分子數(shù)不同；基因組較小，為單倍體并且所含基因?yàn)閱慰截?；基因組序列基本上都是編碼序列；基因的連續(xù)性不同；相關(guān)基因串聯(lián)成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位。第五章

5、概念：基因表達(dá)：基因表達(dá)：是由基因指導(dǎo)合成功能產(chǎn)物RNA和蛋白質(zhì)的過程，體現(xiàn)了DNA與蛋白質(zhì)、基因型與表型、遺傳與代謝的關(guān)系。管家基因：管家基因：編碼細(xì)胞基本組分的基因和細(xì)胞基本代謝相關(guān)基因。順式作用元件：順式作用元件：是基因序列的一部分，是RNA聚合酶或調(diào)節(jié)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)，包括啟動(dòng)子、終止子，原核生物的操縱基因和激活蛋白結(jié)合位點(diǎn)、真核生物的增強(qiáng)子和沉默子等。反式作用因子：反式作用元件即調(diào)節(jié)基因，通過編碼產(chǎn)物調(diào)控基因表達(dá)，其編碼產(chǎn)物為反

6、式作用因子。正調(diào)節(jié)：正調(diào)節(jié)：指調(diào)節(jié)蛋白與調(diào)控序列結(jié)合促進(jìn)基因表達(dá)。負(fù)調(diào)節(jié)：負(fù)調(diào)節(jié)：指調(diào)節(jié)蛋白與調(diào)控序列結(jié)合阻遏基因表達(dá)。增強(qiáng)子：增強(qiáng)子：是真核生物促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的一類調(diào)控序列，與啟動(dòng)子可以相鄰、重疊或包含，通過結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白、改變?nèi)旧|(zhì)構(gòu)象而促進(jìn)一種或一組基因的轉(zhuǎn)錄。印跡基因：印跡基因：來自父母的本源基因，一方表達(dá)一方不表達(dá)。原核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)：原核生物基因表達(dá)調(diào)控的特點(diǎn)：①既有正調(diào)節(jié)，又有負(fù)調(diào)節(jié)②調(diào)節(jié)蛋白都是DNA結(jié)合蛋白③存在衰減調(diào)

7、控機(jī)制④存在應(yīng)急應(yīng)答調(diào)控機(jī)制操縱子的基本結(jié)構(gòu)：操縱子的基本結(jié)構(gòu)：一個(gè)啟動(dòng)子、一個(gè)操縱基因及其所控制的一組功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因等組成。乳糖操縱子的兩種調(diào)控模式：乳糖操縱子的兩種調(diào)控模式：P118試劑的作用：試劑的作用：蛋白酶K（水解由脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸的羧基形成的肽鍵，使DNA游離）、EDTA（使細(xì)菌懸?。DS（去污劑裂解細(xì)胞、使蛋白質(zhì)變性）、巰基乙醇（快速裂解細(xì)胞，解離和蛋白，釋放RNA）、溴化乙錠（染色、解旋DNA）、上樣緩

8、沖液（監(jiān)測電泳進(jìn)程，增加樣本密度）、ddNTP（DNA測序）核酸純度判定比值核酸純度判定比值①純度較高的DNA≈1.8如果1.8可能含有RNA或DNA部分降解OD260OD280OD260OD280如果2.0可能有RNA降解OD260OD280核酸電泳用于構(gòu)型分析：核酸電泳用于構(gòu)型分析：①閉環(huán)DNA②快環(huán)DNA③線性DNADNA測序方法類型：測序方法類型：①鏈終止發(fā)②化學(xué)降解發(fā)③DNA測序自動(dòng)化第八章概念：雜交：雜交：不同來源單鏈核酸的

9、退火。探針：探針：是用于指示特定物質(zhì)的性質(zhì)或狀態(tài)的一類標(biāo)記分子。印跡：印跡：是指將核酸和蛋白質(zhì)等樣品用類似于吸墨跡的方法從凝膠等電泳或?qū)游鼋橘|(zhì)中轉(zhuǎn)移到合適的印跡膜上，樣品在印跡膜上的相對位置與在凝膠中時(shí)一樣。DNA印跡和印跡和RNA印跡方法的差別：印跡方法的差別：①電泳分離：DNA片段通過瓊脂糖凝膠電泳按長度分離；為了保持RNA呈單鏈狀態(tài)進(jìn)行電泳，以使RNA按分子大小分離，需要先用變性劑將RNA樣品完全變性，在通過瓊脂糖凝膠電泳。②變性

10、：DNA用堿液處理電泳凝膠；RNA只能用甲醛、乙二醛、二甲亞砜等變性。蛋白質(zhì)印跡與核酸印跡方法的差別：蛋白質(zhì)印跡與核酸印跡方法的差別：“探針”不同，是能與目的蛋白特異性結(jié)合的抗體。DNA印跡（印跡（southernblot）、RNA印跡（印跡（Nthernblotting）、蛋白質(zhì)印跡（、蛋白質(zhì)印跡（WesternBlot）對應(yīng)的英文簡稱第九章基因芯片的原理：基因芯片的原理：先將大量已知序列的DNA片段作為探針按照一定的陣列高密度固定于

11、基片表面，這樣陣列中的每一個(gè)點(diǎn)實(shí)際上代表了一種特定基因，然后與用熒光素標(biāo)記的待測核酸進(jìn)行雜交。用專門儀器檢測芯片上的雜交信號，經(jīng)過計(jì)算機(jī)分析處理，獲得待測核酸的各種信息。第十章PCR反應(yīng)體系反應(yīng)體系組成包括DNA聚合酶、DNA引物、dNTP原料、目的DNA模板和緩沖溶液等。PCR反應(yīng)原理反應(yīng)原理變性、退火、延伸，以上三部的循環(huán)。多重多重PCR、ASPCR、RTPCR、QPCR的應(yīng)用：的應(yīng)用：基因組DNA擴(kuò)增、基因分離、基因克隆、克隆鑒定