切片標(biāo)本的制作

1、1切片標(biāo)本的制作切片標(biāo)本的制作本次實(shí)驗(yàn)采用的是石蠟切片法。石蠟切片法的程序如下：取材→固定→沖洗（洗滌）→脫水脫水→透明透明→包埋→切片→貼片→烘片→脫蠟脫蠟→復(fù)水復(fù)水→染色染色→脫水透明→封藏。上述每個(gè)程序的要求和方法可歸納為透蠟制片和染色兩大步驟，現(xiàn)簡(jiǎn)單介紹如下：脫水脫水步驟為：將組織塊浸入系列酒精70%→80%→95%→100%→100%各30min。脫水的實(shí)際時(shí)間長(zhǎng)短視組織塊的大小而定，但不宜過長(zhǎng)。透明透明步驟為：將組織塊浸入二

2、甲苯與無水乙醇（1：1）的混合液30min→二甲苯30min→二甲苯30min。透蠟透蠟步驟為：將組織塊浸入二甲苯與石蠟（1：1）的混合液30min→石蠟30min→石蠟30min。脫蠟脫蠟程序?yàn)椋杭兌妆剑撓灒?5min→純二甲苯15min→二甲苯：純乙醇（1：1）3min復(fù)水復(fù)水程序?yàn)椋杭円掖?min→95%乙醇3min→90%乙醇3min→80%乙醇3min→70%乙醇3min→60%乙醇3min→50%乙醇3min→30%乙醇

3、3min→蒸餾水H、E染色染色程序?yàn)椋簩⒁褟?fù)水的切片放入蘇木精染液中（30分鐘以上），水洗2分鐘，在05%的鹽酸水中分色3秒（當(dāng)在顯微鏡下檢查時(shí)，核褪至淡紅色，細(xì)胞質(zhì)及結(jié)締組織幾近無色即可）蒸餾水洗1分鐘，01%氨水中藍(lán)化（1~3分鐘，核呈藍(lán)紫色），蒸餾水洗（1分鐘），切片由低至高濃度的系列酒精中脫水（每級(jí)3~5分鐘）至95%乙醇→切片入05%伊紅中復(fù)染（3分鐘）（伊紅由95%乙醇配制的）→95%乙醇中分色（顯微鏡檢查呈藍(lán)紫色，胞質(zhì)及結(jié)

4、締組織為粉紅色）→95%乙醇輕洗（除去玻片上多余的伊紅染液。動(dòng)作要迅速，否則組織上的伊紅要脫下來）。透明透明程序?yàn)椋簩⒁衙撍那衅来畏湃爰円掖迹憾妆剑?：1）→二甲苯⑴→二甲苯⑵中，每級(jí)15分鐘。31217、包埋包埋將完成透蠟程序的肌肉組織塊包埋在含有石蠟的小紙盒內(nèi)，便于保存及制作薄的石蠟切片。包埋時(shí)把熔化的石蠟倒入小容器內(nèi)，然后迅速夾取肌肉組織放入小容器中，并適當(dāng)調(diào)整肌肉組織塊的位置和方向，待容器中的石蠟迅速凝成蠟塊。1218、切

5、片切片肌肉組織塊經(jīng)上述各程序的處理后，不僅變得較硬，而且有了石蠟的支撐，經(jīng)修整后便可以放在切片機(jī)上切成極薄的石蠟切片。切片的厚度為8um。1219、貼片貼片把由切片機(jī)上切下的含有肌肉組織的蠟條割成小段，再將小段蠟條安放在均勻涂過蛋白質(zhì)的載玻片上，滴上蒸餾水使其在展片臺(tái)上加熱，在加熱過程中使蠟條適當(dāng)?shù)厣煺归_，以此使組織伸展平正，然后把玻片上多余的水分去掉。12110、烘片烘片把貼好蠟片的載玻片置于37℃的恒溫箱中烘烤24小時(shí)以上，使切片干

6、燥。122染色染色以下各步驟均需在染色缸中進(jìn)行，所以需預(yù)先準(zhǔn)備好一套清潔的染色缸，分別貼上系列標(biāo)簽并加入相應(yīng)的藥品。1221、脫蠟脫蠟通過切片、貼片及烘片后，肌肉組織仍埋藏在蠟中，為了使肌肉組織順利染上色，必須先將肌肉組織切片上的蠟去掉，因此要把貼片烘干后的的玻片放入含有二甲苯的染色缸內(nèi)，使蠟溶解在二甲苯中。脫蠟程序?yàn)椋杭兌妆剑撓灒?5min→純二甲苯15min→二甲苯：純乙醇（1：1）3min1222、復(fù)水復(fù)水在肌肉組織透蠟包埋前

7、已把肌肉組織中的水去除干凈了，而沒有經(jīng)過復(fù)水處理的肌肉組織切片不能放入水溶性的染料中染色，所以染色前肌肉組織切片中必須經(jīng)復(fù)水處理，也就是使得肌肉組織中含有水分。肌肉組織切片復(fù)水過程必須逐漸進(jìn)行，即從純乙醇——經(jīng)下降的各濃度系列酒精直至水，每級(jí)3~5分鐘。在水中的放置時(shí)間要稍加長(zhǎng)，大約10分鐘以上，蘇木精染液才能上色。復(fù)水程序?yàn)椋杭円掖?min→95%乙醇3min→90%乙醇3min→80%乙醇3min→70%乙醇3min→60%乙醇3m

8、in→50%乙醇3min→30%乙醇3min→蒸餾水1223、染色染色組織或細(xì)胞的許多結(jié)構(gòu)在自然狀態(tài)下是無色或具有很淡的顏色的，要區(qū)分出組織和細(xì)胞的各種結(jié)構(gòu)是極為困難的，為了更好地對(duì)組織的各種結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察，必須染色。染色時(shí)將切片放入預(yù)先制好的染色劑內(nèi)，根據(jù)不同的目的、不同的染色劑的要求染色一定時(shí)間后取出切片，切片再行水洗、分色或復(fù)染等程序的處理。本實(shí)驗(yàn)的染色采用蘇木精（hematoxylin）、伊紅（eosin）染色法，簡(jiǎn)稱為H、E染色