毒死蜱降解菌Cupriavidus nantongensis X1的LuxAB基因標(biāo)記及其土壤中定殖與遷移.pdf

1、本文的研究對象為毒死蜱的高效降解菌X1，分別通過電轉(zhuǎn)化法、CaCl2轉(zhuǎn)化法將含有LuxAB發(fā)光酶基因的質(zhì)粒pTR102導(dǎo)入毒死蜱的高效降解菌株X1，研究了轉(zhuǎn)化子在不同類型、不同處理土壤中的存活狀況；對標(biāo)記菌Lux-X1和出發(fā)菌X1降解毒死蜱及其產(chǎn)物TCP的特性進一步分析；深入探究了土壤非生物因子溫度、濕度對Lux-X1在土壤中的定殖動態(tài)、遷移分布的影響，研究結(jié)果歸納如下：
　　1、降解菌X1菌株不僅對毒死蜱有高效的降解效果，對其產(chǎn)

2、物3,5,6-TCP也有降解能力，在24h時對200mg/L的毒死蜱降解能力達到60.7％，對中間產(chǎn)物TCP的降解率可達69.3%。
　　2、通過電轉(zhuǎn)化和CaCl2轉(zhuǎn)化法成功地將發(fā)光酶基因LuxAB導(dǎo)入降解菌X1中，即 Lux-X1標(biāo)記菌株。在暗室中觀察菌落發(fā)光活性，可得電轉(zhuǎn)化的成功率大于 CaCl2轉(zhuǎn)化法，12次連續(xù)無抗性培養(yǎng)傳代，結(jié)果可知電轉(zhuǎn)化所得標(biāo)記菌的遺傳穩(wěn)定性較CaCl2法所得穩(wěn)定。
　　3、在不同時間內(nèi)，標(biāo)記菌L

3、ux-X1與出發(fā)菌X1降解相同濃度毒死蜱的趨勢基本一致，當(dāng)時間為72h時，毒死蜱的降解率分別為出發(fā)菌79.25%，電轉(zhuǎn)化的標(biāo)記菌72.82%，CaCl2轉(zhuǎn)化的標(biāo)記菌68.96%；同時對代謝產(chǎn)生20mg/L的TCP能降解完全。降解毒死蜱的能力有略微差異，外源性DNA轉(zhuǎn)入X1菌后對毒死蜱的降解能力影響不大，因此可以將Lux-Xl菌株釋放到土壤環(huán)境中進行檢測和進一步的修復(fù)研究。
　　4、將標(biāo)記菌Lux-Xl分別接種于砂土、黃褐土的滅菌和

4、非滅菌土中，存活狀況如下：砂土>黃褐土；滅菌土>非滅菌土。整體規(guī)律為接菌后的前18d活菌數(shù)下降趨勢較快，之后緩慢減少趨于不變，質(zhì)粒保留率在0-30d內(nèi)逐漸降低，30d以后，質(zhì)粒的變化趨勢較平緩，可見一個月的時間標(biāo)記菌能適應(yīng)環(huán)境，定殖其中。
　　5、土柱分別于10℃、20℃、30℃恒溫培養(yǎng)，在砂土和紅壤環(huán)境中，溫度越高，遷移速度越慢，隨著溫度的變化，標(biāo)記菌Lux-Xl在10℃、20℃、30℃向下遷移速度依次遞減，而黃褐土環(huán)境下溫度增

5、高，遷移速度增大，在10℃、20℃、30℃向下遷移速度依次遞增，因此不同類型的土壤，溫度對其中菌的遷移影響存在差異。
　　6、土柱環(huán)境在30%WHC、60%WHC和100%WHC的情況下，標(biāo)記菌 Lux-Xl在砂土和黃褐土環(huán)境中，田間最大持水量的60%時，菌落移動的最快，遷移速度依次為60%WHC、30%WHC、100%WHC，而紅壤環(huán)境，在100%WHC、60%WHC、30%WHC遷移速度依次增大，三種不同類型的土壤，受濕度的影