優(yōu)化kozac序列

1、SD序列（ShineDalgarnosequence）：mRNA中用于結合原核生物核糖體的序列。SD序列：在細菌mRNA起始密碼子AUG上游10個堿基左右處，有一段富含嘌呤的堿基序列，能與細菌16SrRNA3’端識別，幫助從起始AUG處開始翻譯。在原核生物中核糖體中與mRNA結合位點位于16SrRNA的3’端mRNA中與核糖體16SrRNA結合的序列稱為SD序列(SDsequence)它是1974年由J.Shine和L.Dalgarno

2、發(fā)現(xiàn)的故此而命名。SD序列是mRNA中5’端富含嘌呤的短核苷酸序列一般位于mRNA的起始密碼AUG的上游3至11個核苷酸處并且同16SrRNA3’端的序列互補。所謂Kozak規(guī)則，即第一個ATG側翼序列的堿基分布所滿足的統(tǒng)計規(guī)律，若將第一個ATG中的堿基A，T，G分別標為1，2，3位，則Kozak規(guī)則可描述如下：(1)第4位的偏好堿基為G；(2)ATG的5’端約15bp范圍的側翼序列內不含堿基T；(3)在3，6和9位置，G是偏好堿基；(

3、4)除3，6和9位，在整個側翼序列區(qū)，C是偏好堿基。Kozak規(guī)則是基于已知數(shù)據(jù)的統(tǒng)計結果，不見得必須全部滿足，一般來說，滿足前兩項即可Kozak研究過起始密碼子ATG周邊堿基定點突變后對轉錄和翻譯所造成的影響，并總結出在真核生物中，起始密碼子兩端序列為：——GNCNCNANNATGG——，如GCCACCATGG、GCCATGATGG時，轉錄和翻譯效率最高，特別是3位的A對翻譯效率非常重要。該序列被后人稱為Kozak序列，并被應用于表達

4、載體的構建中。wrote：若我的基因要重組入腺病毒或痘苗病毒進行表達，需要加入此序列嗎？reply：可以加入，在真核系統(tǒng)中目的基因的表達會更高。需要加入很多載體說明書上就明確寫著推薦使用kozak序列以利于表達加上后，表達的效率會高出很多倍，由于是對于哺乳動物細胞核糖體結合效率而言。當然，也可以不加，并不是所有真核系統(tǒng)都需要加入這么一段基因，比如桿狀病毒，具體需要看載體的啟動子、核糖體結合位點和細胞種類等影響應素的具體要求了。例如pcD

5、NA3載體建議需要加的，加入后的轉染COS1，核糖體能很快結合mRNA的此位點進入表達，表達效率要比不加高10倍之多。KozaK序列指真核生物翻譯起始的共有序列(ACCATGG)即3位A和4位的G使ATG成為最佳翻譯起始信號.腺病毒在細胞核內復制其轉錄產(chǎn)物mRNA需轉運至胞漿后翻譯成為蛋白.因此，采用翻譯起始共有序列(Kozak序列)避免基因中存在出核信號序列(如Rev依賴性序列)避免過高的AT含量有助于其表達效率的提高。痘苗病毒的翻譯