液相柱子的使用及維護(hù)

1、答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖，只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子不能反沖，不過(guò)目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見(jiàn)了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用，反向沖洗。2.對(duì)于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測(cè)定分子量比較高的多肽，尤其

2、重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長(zhǎng)。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。如果要加快平衡時(shí)間，把前面用來(lái)平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。3.測(cè)定多肽，一般采用什么柱子？流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽，應(yīng)該怎么選擇柱子？答：分子量不

3、高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。4.氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí)，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后，柱效降低，峰形改變，如何恢復(fù)？答：氨基柱測(cè)酸性樣品，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議：用510倍的柱體積的含0.51.0％NH3的乙腈水(50:50)溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)

4、然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨），之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。還是裝一個(gè)預(yù)柱。8.如果柱子取下來(lái)放置一段時(shí)間，需要做什么保護(hù)嗎？答：對(duì)于一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中，然后用堵頭塞緊柱兩頭，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。9.流動(dòng)相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機(jī)理是什么？答：《高效液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說(shuō)：甲醇為質(zhì)