堿性蛋白與酸性蛋白的顯示

1、堿性蛋白與酸性蛋白的顯示,目的要求,1.學(xué)會(huì)制血涂片2.了解堿性蛋白與酸性蛋白的顯示方法的原理及操作步驟3.了解堿性蛋白與酸性蛋白的分布,實(shí)驗(yàn)原理,以酸性氨基酸成分為主的蛋白質(zhì)為酸性蛋白;以堿性氨基酸成分為主的蛋白質(zhì)為堿性蛋白。細(xì)胞核內(nèi)有組蛋白（堿性蛋白）及少量酸性蛋白，細(xì)胞質(zhì)中主要有酸性蛋白，標(biāo)本經(jīng)三氯醋酸處理抽提掉核酸后，用不同pH值的快綠染液分別染色，使細(xì)胞內(nèi)的酸性蛋白和堿性蛋白質(zhì)顯示出來(lái)。,實(shí)驗(yàn)用品,1.器材：水浴鍋，染色缸

2、，載玻片，注射器等2.試劑：①70％乙醇溶液 ②5％三氯醋酸溶液 ③0.2％快綠 ④0.005％Na2CO3溶液 ⑤1.75mol/L HCL:鹽酸0.109ml（比重1.19）加蒸餾水至100ml（若鹽酸比重1.16則取0.13ml） ⑥酸性蛋白染色液（pH2.2）：0.2％快綠和等量1.75mol/L HCL溶液混合而成 ⑦堿性蛋白染色液（pH8.0）：0.2％快綠和等量0.005％Na

3、2CO3溶液混合而成。3.材料：蟾蜍血涂片。,蟾蜍取血,常用搗髓法處死蟾蜍，即用解剖針搗毀其腦組織和脊髓。具體方法是，左手握住蟾蜍的身體和四肢，使其腹部貼著掌心，食指壓住蟾蜍頭部前端使其盡量腹屈。在頭與軀干之間可觸及一凹陷(即枕骨大孔所在處)，右手持解剖針直插入此凹陷約l～2mm，隨即將針尖轉(zhuǎn)向頭側(cè)插入顱腔搗毀腦組織。然后將解剖針抽回并轉(zhuǎn)向尾側(cè)刺入脊椎管內(nèi)搗毀其脊髓。如此直至其四肢松軟，呼吸消失為止。 以破壞脊髓法處死蟾蜍，將其腹面

4、向上放人蠟盤(pán)中，剪開(kāi)胸腔，打開(kāi)心包。小心將心臟剪一小口，取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端，推片，按此法制備二張血涂片，室溫晾干。,,1取一滴血滴于玻片的一端2以另一玻片以30-45度的角度勻速向前推片，中間不要停頓，不可反復(fù)涂片，動(dòng)作要快以防止血液凝固。3自然干燥后固定。,方法與步驟,1.新鮮血涂片自然干燥10min，入70%乙醇溶液中固定10min。2.取出晾干入70－90℃5％三氯醋酸溶液15－20min。3.在冷5％三氯醋酸