果汁中甲醛態(tài)氮之測定

1、蔬果汁中甲醛態(tài)氮之測定(電位滴定法) Determination method for amino nitrogen content in fruit juicepage 66,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握甲醛滴定法測定胺態(tài)氮含量的原理和操作要點(diǎn)鑑定果汁成分，,原理,加入甲醛溶液於胺基酸雙性離子樣品中，其與胺基酸的非解離型胺基反應(yīng)，形成羥甲基衍生物[單羥甲基(-NH-CH2OH)和二羥甲基(-N(CH2OH)2 )等]，加入的甲醛固定住胺基

2、的鹼性，使羧基顯示出酸性，此反應(yīng)完全定量進(jìn)行會(huì)釋放氫離子，此時(shí)以NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定-NH3+基上的H+，每釋放一個(gè)H+，就相當(dāng)有一個(gè)胺基氮。 (或完全中和-COOH基時(shí)的pH值為8.4~9.2) ，根據(jù)pH計(jì)指示的pH值判斷和控制滴定終點(diǎn)依鹼液消耗之體積換算為百分率，即為甲醛值，甲醛值乘以1.4即為甲胺基氮（甲醛態(tài)氮Formaldehyde-nitrogen）之量。,根據(jù)胺基酸的兩性作用，用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，。其離子反應(yīng)式如下：,

3、器材,(一) 電子式分析天平(靈敏度為0.1mg) 一臺(tái)(二) 滴定管(50mL) 一支(三) 滴定管架(白色底座) 一臺(tái)(四) 小漏斗(直徑5cm) 一個(gè)(五) 燒杯(50mL) 一個(gè)(六) 電磁攪拌器附滴定管夾(七)pH度計(jì)：直接讀數(shù)，測量範(fàn)圍0～14 pH，精度 ± 0.1 pH。,材料及藥品,柳橙汁(或芭樂汁) ： 100 mL37%甲醛pH7.00 標(biāo)準(zhǔn)液pH10.00 標(biāo)準(zhǔn)液0. 1N NaOH

4、 標(biāo)準(zhǔn)液(須知力價(jià))0.01N NaOH 標(biāo)準(zhǔn)液(須知力價(jià)),試樣的製備,一、濃縮蔬果汁 在濃縮蔬果汁中加入與在濃縮過程中失去的天然水分等量的水，使其成為果汁並 充分混勻供測試用。二、果汁固體飲料 稱取約125g（精確至0.001g）試樣溶解於蒸餾水中將其全部轉(zhuǎn)移到250mL容量瓶 中用蒸餾水稀釋至刻度充分混勻供測試用。,試樣的製備,三、含有碳酸氣的蔬果汁飲料稱取500g試樣在沸水浴上加熱15min不斷攪拌

5、使二氧化碳?xì)怏w盡可能排除去冷卻後用水補(bǔ)充至原體積充分混勻供測試用。四、蔬果原汁及蔬果汁飲料 將試樣充分混勻，直接測定。,測定步驟,校正pH計(jì)預(yù)熱10min用4.01的緩衝溶液校正pH計(jì)。再用6.86的緩衝溶液校正pH計(jì)。甲醛溶液(臨用前配): 將25 mL甲醛(37%)以 0.l N 氫氧化鈉溶液調(diào)整為 pH 値約為6-7。在以0.01N NaOH 調(diào)整至 8.1。,取燒杯加入 25 g 樣品於150 mL 燒杯

6、中，以 0.l N氫氧化鈉溶液調(diào)整至適當(dāng)pH値8.1，加入 10 mL蒸餾水(取代甲醛溶液)，當(dāng)做空白試驗(yàn)。滴定至8.1，滴定數(shù)為b毫升。稱取樣品約 25 g 於150 mL 燒杯中，以 0.l N氫氧化鈉溶液調(diào)整至適當(dāng)pH値8.1，加入 10 mL甲醛溶液，磁石攪拌3分鐘。以 0.0l N 氫氧化鈉滴定至終點(diǎn)，紀(jì)錄所需氫氧化鈉滴定量，滴定數(shù)為a毫升樣品須做二重覆。,測定步驟,滴定結(jié)果紀(jì)錄表,1.第一次滴定(A)是除去其它游離酸，

7、所消耗的NaOH溶液體積不用於計(jì)算胺基酸態(tài)氮，但可計(jì)算總酸含量）。2.第二滴定(B)才是測定胺基酸，用消耗的NaOH溶液體積進(jìn)行計(jì)算。,計(jì) 算,甲醛態(tài)氮(mg/100g or100 mL)= 每100g(或100mL)試樣中甲醛態(tài)氮的毫克數(shù)(mg/100g或mg/100mL);a：加入中性甲醛溶液後，滴定試樣消耗0.01 mol/L 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積(mL)b：空白滴定體積(mL) F： 0.01N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液

8、的力價(jià)0.14(mg-N/mL)：1 mL 0.01N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液相當(dāng)於氮的毫克數(shù)。允許差 同一樣品的兩次測定結(jié)果之差：樣品之胺基態(tài)氮≥10mg/100g，不得大於2%；胺樣品之基態(tài)氮<10mg/100g，不得大於5%。,適用範(fàn)圍,本法適用於濃縮果蔬汁、果蔬原汁、果蔬汁飲料及果蔬汁固體飲料。,說明及注意事項(xiàng),1、此法適用於測定食品中游離的胺基酸，胺基酸的含量一直是某些發(fā)酵產(chǎn)品如調(diào)味品的品質(zhì)指標(biāo)，也是目前許多保健食品

9、的品質(zhì)指標(biāo)之一，其中的含氮量可直接測定，不同於蛋白質(zhì)的氮，故稱為胺基酸態(tài)氮。胺基酸態(tài)氮反映的是樣品中游離胺基酸的總量。2、固體樣品應(yīng)先進(jìn)行粉碎，準(zhǔn)確稱取後用水萃取，萃取可在50℃水浴中進(jìn)行0.5h即可。液體樣品可直接進(jìn)行測定。3、對於混濁和色深樣液可不經(jīng)處理而直接測定?；蛴秒娢坏味ǚㄟM(jìn)行測定。若樣品顏色較深，可加適量活性炭脫色後再測定，4、與本法類似的還有單指示劑（百里酚酞）甲醛滴定法，此法用標(biāo)準(zhǔn)鹼完全中和-COOH時(shí)的pH為8.

10、5~9.5，但分析結(jié)果稍偏低，即雙指示劑法的結(jié)果更準(zhǔn)確。,說明及注意事項(xiàng),本法準(zhǔn)確快速，可用於各類樣品游離胺基酸含量測定若樣品中只含有單一的已知胺基酸，則可由此法滴定的結(jié)果算出胺基酸的含量。利用甲醛滴定法可以用來測定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加，滴定值也增加，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解完成後，滴定值不再增加。若樣品中含有多種胺基酸（如蛋白質(zhì)水解液），則不能由此法算出胺基酸的含量。影響滴定之因素水溶液中的胺基酸在接近中性的水溶液中

11、，全部解離為雙性離子，因而不能直接用鹼滴定胺基酸的羧基。脯胺酸與甲醛作用後，生成的化合物不穩(wěn)定，導(dǎo)致滴定後結(jié)果偏低。酪胺酸含酚基結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致滴定結(jié)果偏高。,參考資料,甲醛態(tài)氮一般是用以檢驗(yàn)果汁的純度，其檢驗(yàn)方法可參考CNS 12630「水果及蔬菜汁飲料檢驗(yàn)法-甲醛態(tài)氮之測定」。CNS2377「果汁及蔬果之飲料（已包裝）」中有其他的詳細(xì)規(guī)範(fàn)。Beddows et al., 1979 C.G. Beddows, M. Ism

12、ail and K.H. Steinkraus, The use of biomelain in the investigation of fermentation, Journal of the Science of Food and Agriculture 11 (1979), pp. 379–388.,題目,甲醛法測定胺基酸含量的原理是什麼？為什麼氫氧化鈉溶液滴定胺基酸的—NH3+基上的H+，不能用一般的酸鹼指示劑？在測定過程

13、中為什麼要加入中性甲醛的作用是什麼？甲醛態(tài)氮主要是定量醬油中的：(A) 果糖衍酸 (levulinic acid) (B) 甲醛 (formaldehyde)(C) 脂肪酸 (fatty acid) (D) 胺基酸 (amino acid),酸鹼度計(jì)構(gòu)造及使用說明,能夠自行辨識(shí)五種標(biāo)準(zhǔn)溶液, pH 4.01, pH 6.86, pH 7.01, pH 9.18 ,pH 10.01. LCD大型顯示幕CFM鍵: 校正確認(rèn)鍵CA

14、L鍵: 校正鍵▼℃:未接溫渡探棒手動(dòng)調(diào)整溫度上或選擇緩衝液▲℃:未接溫渡探棒手動(dòng)調(diào)整溫度下或選擇緩衝液MR :上一測試記憶MEM : 測試記憶鍵COMM : 設(shè)定RS-232傳輸速度.RANGE : 切換PH / ORP 測試模式ON/OFF : 開/關(guān)鍵電源插座.PH或ORP電極接頭參考電極接頭溫度探棒接頭重新設(shè)定鍵RS-232電腦連接埠,pH校正程序--單點(diǎn)及雙點(diǎn)校正,在清潔的燒杯中, 分別倒入約4公分深

15、的pH 7.0及pH 4.0(或pH 10.0)標(biāo)準(zhǔn)溶液. 儘可能使用塑膠燒杯, 以避免EMC的干擾.若您測量酸性樣本, 第二組校正液請用pH 4.0標(biāo)準(zhǔn)液; 若您測量鹼性樣本, 則用pH 10.0作為第二點(diǎn)校正液.為了較好的準(zhǔn)確度, 每種校正液均使用兩個(gè)燒杯為佳. 第一個(gè)用來漂洗電極, 第二個(gè)才用來實(shí)際校正用. 將電極及溫度探棒安裝妥當(dāng)後, 打開電源.將電極前端約4cm置入pH 7.0標(biāo)準(zhǔn)溶液中. 並輕微攪拌. 溫度探棒應(yīng)儘量

16、靠近pH電極的薄膜玻璃頭.按下CAL鍵. ”CAL” & “ “符號(hào)會(huì)顯示,螢?zāi)挥蚁路絼t指示正確校正溶液值.用▲℃及▼℃選擇不同的校正溶液系統(tǒng)(PH 4.01,PH 6.86,PH 9.18).此時(shí) “ NOT READY “字樣於螢?zāi)簧祥W爍.直到螢?zāi)怀霈F(xiàn) ”READY” 和 ”CFM”字樣時(shí)請按下CFM鍵確認(rèn). 即完成零點(diǎn)校正【註】若您只想進(jìn)行單點(diǎn)校正, 可按下CAL鍵離開校正模式. 然而, 哈納建議您進(jìn)行下述

17、的第二點(diǎn)(斜率)校正, 較為精確.,pH電極保養(yǎng),pH電極薄膜頭應(yīng)經(jīng)常維持濕潤. 若因保存時(shí)間長,使用時(shí)測值不穩(wěn)定, 容易漂移, 原因是pH電極薄膜頭脫水過乾造成. 使用後只要把pH電極薄膜頭浸在HI70300L電極保存溶液或pH 4.01緩衝液中?；蚴褂们鞍裵H電極薄膜頭浸在HI70300L電極保存溶液或pH 4.01緩衝液中時(shí)間在1～2小時(shí)即可.pH電極參考透析膜孔的堵塞是另一個(gè)常見的故障原因. 預(yù)防的方法是使用哈納儀器出品的一系

18、列電極清潔液, 做例行性保養(yǎng), 可以延長其使用壽命.一般清潔:浸入HI 7061一般清潔液中約30分鐘蛋白質(zhì):浸入HI 7073蛋白質(zhì)清潔液中15分鐘無機(jī)物:浸入HI 7074無機(jī)物清潔液中15分鐘油脂類:以HI 7077油脂清潔液漂洗重要事項(xiàng): 在進(jìn)行以上清洗程序後, 請務(wù)必使用大量去離子水(Distilled Water)沖洗電極, 並將電解液換新(使用膠質(zhì)電解液之電極則不用換更). 並在HI 70300保存溶液中

19、浸泡1小時(shí)後, 才可以恢復(fù)正常之測量.,常見的電極問題,讀數(shù)不穩(wěn):原因?yàn)橥肝瞿ぬv或阻塞. 請依上述清潔程序處理. 或?yàn)殡姌O內(nèi)之電解填充液太低所致. 單透析膜電極請用HI 7071, 雙透析膜電極請用HI 7082電解液(僅可重裝電解液型電極適用).薄膜頭或透析膜太乾燥: 浸泡在HI 70300保存液中至少1小時(shí).讀數(shù)亂跳:將電極前端浸泡於約50-60℃的HI 7082溶液中約1小時(shí), 再以大量去離子水沖洗. 並更換其電解填充

20、液. 單透析膜電極請用HI 7071, 雙透析膜電極請用HI 7082電解液(僅可重裝電解液型電極適用).,酸鹼度的測量,在開始測量前,先確定完成pH校正程序(詳見後述).打開儀器電源. 預(yù)設(shè)模式即為酸鹼度測量.測量酸鹼度十分的簡單, 僅需將pH電極及溫度探棒前端浸入待測樣本深約4cm.LCD顯示幕中, 右下方為溫度, 中間為酸鹼度值. 使用自動(dòng)溫度補(bǔ)償(ATC)時(shí),溫度探棒應(yīng)儘量接近pH電極的薄膜玻璃頭, 其結(jié)果較正確.哈納

21、建議您: 在每次的測量前, 先使用該待測溶液漂洗電極, 可加快電極的反應(yīng)速度, 以及減少樣本液的交互污染.,手動(dòng)溫度補(bǔ)償,未接溫度探棒的情況下,螢?zāi)恢械摹?℃ ”會(huì)呈閃爍狀.當(dāng)溫度探棒未被連接時(shí), 可使用哈納的或其他準(zhǔn)確的玻璃溫度計(jì)來測量被測樣本的溫度.以▲ & ▼ 鍵輸入該溫度值即可,pH校正程序單點(diǎn)及雙點(diǎn)校正,接著螢?zāi)惶崾緦㈦姌O放入第二組校正液中(PH 4.01 或 PH 10.01)接著將電極用清水沖洗後, 再用下個(gè)